[发明专利]一种高效扩增CD3-CD56+的自然杀伤细胞培养系统的方法

摘要

本发明涉及一种高效扩增CD3^-CD56⁺的自然杀伤细胞培养系统的构建方法，经抗HER2单抗包被、NK细胞的活化和NK细胞的扩增，培养14天后即得CD3^-CD56⁺的自然杀伤细胞培养系统。本发明构建方法采用的抗HER2单抗在1998年已被美国FDA认证的可用于临床的药物，IL-2、IL-15和IL-21均为临床用药，原料来源广泛，成本低廉，方法简单，易于操作，扩增效率高，易于推广。

主权项

一种高效扩增CD3^‑CD56⁺的自然杀伤细胞培养系统的构建方法，其特征在于：步骤如下：⑴抗HER2单抗包被用PBS稀释抗HER2单抗，包被T75培养瓶，抗HER2单抗的浓度为10‑50ug/cm²，置4℃冰箱过夜，吸弃培养瓶中的稀释液待用；⑵自体血清的制备采外周血经Ficoll分离，获得正常血浆，56℃灭活、离心后得到血清，置4℃冰箱储存待用；⑶NK细胞的活化采外周血经Ficoll分离获得外周血单个核细胞，用无血清培养基AIM‑V调整外周血单个核细胞的浓度至少1×10⁶个/ml，然后加入AIM‑V20ml，AIM‑V中内含细胞因子IL‑2500‑1000u/ml、IL‑15 10‑20ng/ml和IL‑21 5‑10ng/ml，再加入体积百分数5‑10%的血清，记为第0天；⑷NK细胞的扩增培养的第3、5、7天补充无血清培养基AIM‑V，依次加入40ml、140ml、400ml，并同时添加细胞因子IL‑2 500‑1000u/ml、IL‑15 10‑20ng/ml和IL‑21 5‑10ng/ml和5‑10%（体积百分数）血清，进行扩增培养，培养14天后，即得CD3^‑CD56⁺的自然杀伤细胞。