[发明专利]哺乳动物细胞中使用独特的高密度生长和转染培养基与表达增强剂对的高产量瞬时表达

摘要

本发明大体上是针对适用于将大分子和化合物(例如核酸分子)引入到细胞(例如真核细胞)中的细胞培养基(尤其是无血清、非动物来源和/或化学成分确定的培养基)。根据本发明，所述引入可以在所述培养基存在下进行。含有所述经引入的物质的细胞可以接着在所述培养基中加以培养，且所述经引入的物质对所述细胞的作用可以经测量或测定。具体来说，本发明允许将核酸分子(例如载体)引入到细胞(尤其真核细胞)中以及在所述细胞中表达由所述核酸分子编码的蛋白质。本发明避免了每次用所述细胞执行不同程序(例如培养细胞对转染细胞)时更换所述细胞培养基的需要。本发明还涉及适用于培养和转化/转染细胞的组合物和试剂盒。

主权项

1.一种在培养的293细胞中产生重组蛋白的方法，所述方法包含：在细胞培养基中获得包含293细胞的悬浮培养物，所述悬浮培养物具有在2×106到2×107个细胞/毫升之间的细胞密度；用表达载体转染所述293细胞，所述表达载体含有能够产生所表达的蛋白质的基因序列；将所述经转染的293细胞孵育第一时间段；使所述经转染的293细胞与至少一种表达增强剂组合物接触，所述表达增强剂组合物包含丙戊酸和/或丙戊酸钠；将所述经转染的293细胞在所述表达增强剂组合物存在下孵育第二时间段，使得所述载体表达所述蛋白质；以及在所述第二时间段之后收获所述经转染的293细胞，其中所述细胞培养基在所述转染步骤之后不经过更换、补给或补充。