[发明专利]有助于选择被特定免疫球蛋白基因重组牛痘病毒感染的细胞的融合蛋白有效

专利信息
申请号: 201380033060.7 申请日: 2013-04-26
公开(公告)号: CN104520444B 公开(公告)日: 2017-12-12
发明(设计)人: E·S·史密斯;T·潘迪纳;L·A·克罗伊;M·帕里斯;M·佐德勒;A·莫克萨;R·柯克 申请(专利权)人: 瓦西尼斯公司
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70
代理公司: 北京市金杜律师事务所11256 代理人: 陈文平,徐志明
地址: 美国*** 国省代码: 暂无信息
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摘要: 发明涉及在真核细胞中表达免疫球蛋白分子的高效方法。本发明进一步涉及生产用于在真核细胞中表达的免疫球蛋白重链和轻链文库的方法,特别是使用三分子重组方法。本发明进一步提供了选择和筛选抗原特异性免疫球蛋白分子及其抗原特异性片段的方法。本发明还提供了用于生产、筛选和选择抗原特异性免疫球蛋白分子的试剂盒。最后,本发明提供了通过本文中提供的方法产生的免疫球蛋白分子及其抗原特异性片段。
搜索关键词: 有助于 选择 特定 免疫球蛋白 基因 重组 牛痘 病毒感染 细胞 融合 蛋白
【主权项】:
一种用于选择编码抗原特异性免疫球蛋白重链可变区或其抗原结合片段的方法,包括:(a)将编码免疫球蛋白重链融合多肽的重组牛痘文库引入允许牛痘病毒感染的宿主细胞群体中,所述重组牛痘文库包含在牛痘病毒载体中构建的编码多个免疫球蛋白重链融合多肽的第一多核苷酸文库,其中所述牛痘病毒载体包含(1)编码包含免疫球蛋白重链CH1结构域的第一多肽区段的第一多核苷酸,(2)编码包含位于所述CH1结构域下游的牛痘A56R胞外包膜病毒(EEV)特异性膜蛋白的柄区、跨膜结构域和胞内结构域的第二多肽区段的第二多核苷酸,和(3)编码位于所述CH1结构域上游的免疫球蛋白重链可变区或其片段的第三多核苷酸;(b)将一个或多个编码免疫球蛋白轻链的多核苷酸引入所述宿主细胞群体中,其中免疫球蛋白融合蛋白能够与免疫球蛋白轻链组合,以形成免疫球蛋白分子的抗原结合结构域;(c)允许EEV从所述宿主细胞释放;(d)从上清液收集释放的EEV;(e)将释放的EEV接触抗原;和(f)回收第一多核苷酸文库的编码在EEV的膜表面上表达并且对于所述抗原具有特异性的免疫球蛋白重链融合多肽的多核苷酸。
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