[发明专利]5’保护依赖性扩增

摘要

本发明涉及从包含5’保护基团的RNA产生标记的核酸的方法，所述方法包含以下步骤：获得核酸模板链的混合物，所述混合物包含所述RNA以及进一步潜在的其他无5’保护基团的核酸，将至少一种寡核苷酸引物与所述RNA以及潜在的其他核酸的模板链退火，并且模板序列依赖地延伸所述引物，从而获得与其模板链退火的互补核酸链，或提供位于具有与其模板链退火的互补核酸链的双链中的RNA，和任选地修饰在模板链的5’端或互补链的3’端或两者上无5’保护基团的所述核酸的延伸产物，和标记未被修饰的双链核酸的互补核酸，其中由此标记的核酸具有RNA模板链上的5’保护基团，所述5’保护基团在修饰后被任选地移除，和/或基于互补核酸模板RNA链上5’保护基团的存在，通过双链依赖的连接标记双链的互补核酸，由此特异性地产生与至少原来包含5’保护基团的RNA互补的标记的核酸。

主权项

用于从包含5’保护基团的RNA产生标记的核酸的方法，优选地所述保护基团是5’帽或5’聚磷酸，所述方法包含以下步骤：a)获得核酸模板链的混合物，所述混合物包含所述RNA以及进一步潜在的其他无5’保护基团的核酸，b1)将至少一种寡核苷酸引物与所述RNA以及潜在的其他核酸的模板链退火，并且模板序列依赖地延伸所述引物，从而获得与其模板链退火的互补核酸链，或b2)提供位于具有与其模板链退火的互补核酸链的双链中的RNA，和c)任选地修饰在模板链的5’端或互补链的3’端或两者上无5’保护基团的所述核酸的延伸产物，和d1)标记步骤c)中未被修饰的双链核酸的互补核酸，其中由此标记的核酸具有在步骤c)中的RNA模板链上的5’保护基团，所述5’保护基团在执行完步骤c)后被任选地移除，和/或d2)基于互补核酸模板RNA链上5’保护基团的存在，通过双链依赖的连接标记双链的互补核酸，由此特异性地产生与至少原来包含5’保护基团的RNA互补的标记的核酸。