[发明专利]用于改善细胞鉴定的方法

摘要

本发明涉及显现包含至少一种特定细胞类型的细胞以及至少一种混杂细胞类型的细胞的微观多细胞组织样品中的多种细胞类型的方法，其中所述至少一种特定细胞类型的细胞和所述至少一种混杂细胞类型的细胞二者都包含第二细胞标记，并且所述混杂细胞类型的细胞还包含所述至少一种特定细胞类型的细胞中不存在的第一细胞标记，所述方法包括下述步骤将所述样品的细胞暴露于第一分子检测工具，其特异性结合所述第一细胞标记并且具有检测酶；通过由所述第一分子检测工具上的检测酶催化的反应在具有所述第二细胞标记的细胞内或周围产生封闭聚合物；将所述样品的细胞暴露于包含荧光染料的第二分子检测工具，所述第二分子检测工具特异性结合所述第二细胞标记；去除未与所述样品的细胞结合的第二分子检测工具；并且在所述方法的过程中，通过检测由所述第二分子检测工具的荧光染料得到的荧光信号并且通过检测在所述至少一种混杂细胞类型周围形成的封闭聚合物来显现所述至少一种特定细胞类型和所述至少一种混杂细胞类型。

主权项

一种显现包含至少一种特定细胞类型的细胞以及至少一种混杂细胞类型的细胞的微观多细胞组织样品中的多种细胞类型的方法，其中所述至少一种特定细胞类型的细胞和所述至少一种混杂细胞类型的细胞二者都包含第二细胞标记，并且所述至少一种混杂细胞类型的细胞还包含所述至少一种特定细胞类型的细胞中不存在的第一细胞标记，所述方法包括下述步骤：a)提供微观多细胞组织样品，已知所述样品包含至少一种混杂细胞类型的细胞以及至少一种特定细胞类型的细胞；b)将步骤a)所述的微观多细胞组织样品与至少一种抗体样配体的第一混合物一起温育，其中所述混合物的抗体样配体能够特异性结合混杂细胞上的细胞标记，但不结合所述至少一种特定细胞类型的细胞上的细胞标记，并且其中所述样品与所述第一混合物在有利于形成混杂细胞上的所述细胞标记与所述配体之间的特异性键合的条件下温育，导致形成所述细胞的所述细胞标记与所述配体之间的复合物；c)将步骤b)中形成的复合物与第一检测抗体样配体制剂一起温育，所述第一检测抗体样配体缀合在第一检测酶上，所述第一检测抗体样配体能够特异性结合所述第一混合物的抗体样配体，其中温育在有利于形成所述第一检测抗体样配体与所述第一混合物的抗体样配体之间的特异性键合的条件下进行，导致形成所述第一检测抗体样配体与步骤b)中形成的复合物之间的复合物；d)向步骤c)中形成的复合物中加入包含针对所述第一检测酶的底物的第一底物制剂，并且将得到的混合物在有利于形成可检测的聚合物的条件下温育，由此得到在所述微观多细胞组织样品的混杂细胞内或周围的可检测的积聚的聚合物；e)加入第一一级抗体样配体制剂，其中所述配体能够特异性结合在所述特定细胞类型上的细胞标记，并且将得到的混合物在有利于形成所述细胞标记与所述第一一级抗体样配体之间的复合物的条件下温育；f)向步骤e)中得到的混合物中加入第一二级抗体样配体制剂，所述第一二级抗体样配体缀合到荧光染料上，所述第一二级抗体样配体能够特异性结合所述第一一级抗体样配体，并且将得到的混合物在有利于形成所述第一一级与第一二级抗体样配体之间的特异性键合的条件下温育；g)通过洗涤步骤去除未结合的二级抗体样配体；h)化学固定所结合的一级和二级抗体样配体的复合物；i)将所得到的样品的细胞暴露于一组至少一种荧光染料‑标记的抗体样配体制剂，所述至少一种荧光染料‑标记的抗体样配体制剂的组中的每种制剂能够特异性结合与感兴趣的特定细胞类型相关联的独特的细胞标记，所述至少一种荧光染料‑标记的抗体样配体制剂的组中的每种制剂具有能够发出独特的荧光信号的独特的荧光染料；j)通过洗涤步骤去除未结合的荧光染料‑标记的配体；并且k)在所述方法的过程中，通过检测由一种或多种荧光染料获得的荧光信号并且通过检测已经在所述至少一种混杂细胞类型周围形成的封闭聚合物来显现所述至少一种特定的细胞类型和所述至少一种混杂细胞类型。