[发明专利]用于基因打靶和性状堆叠的工程化转基因整合平台(ETIP)

摘要

描述了一种工程化转基因整合平台(ETIP)，它能在植物基因组中随机地或在靶定位置处插入，从而推动快速选择和检测完美靶定(5'和3'端二者)在ETIP基因组位置处的GOI。本公开文本中的一个要件是在ETIP内引入特定双链断裂。在一些实施方案中，描述了一种ETIP，它使用锌指核酸酶结合位点，但是可利用其它靶向技术，诸如大范围核酸酶、CRISPR、TAL、或亮氨酸拉链。还描述了转基因植物的组合物和用于生成转基因植物的方法，其中供体或有效载荷DNA表达稳定整合入植物细胞中ETIP的外源核酸序列的一种或多种产物(例如蛋白质或RNA)。在多个实施方案中，从构思贯穿开发阶段，ETIP推动测试基因候选和植物表达载体。

主权项

一种用于生成转基因植物细胞的方法，该方法包括：提供植物细胞，其具有包含可靶定核酸分子的基因组DNA，该可靶定核酸分子包含：至少一个位点特异性核酸酶识别位点；第一标志物基因的第一片段；和第二标志物基因的第二片段；用供体核酸分子和位点特异性核酸酶核酸分子转化植物细胞；切割至少一个位点特异性核酸酶识别位点；将供体核酸分子整合入可靶定核酸分子，其中可靶定核酸分子内的整合包含至少一种功能性标志物基因；并生成转基因植物细胞，该转基因植物细胞包含可靶定核酸分子和整合的、包含至少一种功能性标志物基因的供体核酸分子。