[发明专利]细胞制备方法

摘要

描述了使冷冻保存的人肝细胞解冻并将所述肝细胞第二次冷冻保存而不损失活力的方法。其允许通过如下方式制备冷冻保存的汇集自多个供者的人肝细胞使获自多个个体供者的肝细胞解冻，合并所述细胞形成汇集的肝细胞，和将所述汇集的肝细胞重新冷冻保存。该方法涉及使来自多个个体供者的肝细胞解冻，使该解冻的肝细胞维持在高于冷冻温度的低温下(例如，4℃)，并重新冷冻所述解冻的细胞而无需其它操作。所述方法允许所述人肝细胞在解冻后第二次冷冻保存，其活力与单次冷冻保存后相似。该高效方法可用于制备高活力的汇集的人肝细胞以用于使个体差异最小化的实验。

主权项

一种制备冷冻保存的人肝细胞的不用离心的方法，所述人肝细胞由来自多个个体的肝细胞组成，所述方法包括：a)在针对多个个体各自分开的器皿内冷冻保存肝细胞悬液中来自所述多个个体的肝脏的肝细胞；b)使来自多个个体的所述肝细胞悬液的分开的器皿在37℃水浴中解冻直至所述肝细胞悬液达到4℃的温度，仅至所述肝细胞悬液中的冰晶刚刚消失为止，并使所述肝细胞悬液维持在4℃的温度；c)将所述分开的器皿的来自多个个体的肝细胞悬液汇集在一个容器中，其中，该汇集的肝细胞悬液维持在4℃的温度；d)将汇集的肝细胞悬液分配进入多个器皿；和e)将汇集的肝细胞悬液的多个器皿冷冻保存，其中，步骤b)、c)、d)和e)的进行不用稀释或更换所述肝细胞悬液；其中，所述肝细胞悬液包含冷冻保护剂。