[发明专利]多个不同的核酸靶序列同时扩增的方法

摘要

本发明涉及使多个不同的核酸靶序列同时扩增的方法，其包括以下步骤：提供多个不同的核酸聚合物用作模板，每个模板包含特异性靶序列和位于所述靶序列下游的引物退火序列，以及利用包含与引物退火序列至少基本上互补的引物序列的引物寡核苷酸通过聚合酶依赖性扩增反应使所述模板进行扩增。该方法的特征在于，对于聚合酶依赖性扩增反应，使用一组引物寡核苷酸，所述组包含至少两个引物寡核苷酸，其能使相同模板的引物退火序列退火并且聚合酶依赖性扩增反应的效率彼此不同。

主权项

一种使多个不同的核酸靶序列同时扩增的方法，其包括以下步骤：提供一组能使相同核苷酸序列退火的正向引物寡核苷酸，所述组包括具有5’‑X‑N’‑3’结构的第一正向引物寡核苷酸和具有5’‑X‑N¹‑N²‑3’结构的第二正向引物寡核苷酸，其中X是能使第一引物退火序列退火的核苷酸序列，N¹为无或者由一个或多个核苷酸组成，并且N²由一个或多个核苷酸组成；提供多个不同的核酸聚合物用作模板，每个模板包括：(i)与核苷酸序列X互补的正向引物退火序列X’，和(ii)特异性靶序列；以及利用所述组的正向引物寡核苷酸和一个或多个反向引物寡核苷酸，通过聚合酶依赖性扩增反应使模板扩增，其特征在于，第一正向引物寡核苷酸的3’末端核苷酸当使模板退火时与至少两个不同的模板序列完全匹配，并且所述第二正向引物寡核苷酸的3’末端核苷酸当使模板退火时与所述至少两个不同的模板序列中的至少一个错配并且与所述至少两个不同的模板序列中的至少一个完全匹配。