[发明专利]通过在酿酒酵母中的表达产生可分泌抗体的方法在审
| 申请号： | 201380069362.X | 申请日： | 2013-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN104870471A | 公开（公告）日： | 2015-08-26 |
| 发明（设计）人： | R.京特;B.霍克;S.贝克;L.里尔 | 申请（专利权）人： | 默克专利股份公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 周铁;林森 |
| 地址： | 德国达*** | 国省代码： | 德国;DE |
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| 摘要： | 本发明涉及用于在酿酒酵母细胞的表面上产生和非共价表面呈递抗体和衍生片段以及基于其的分子文库的方法。表面呈递的非共价方式使得可能借助高通量筛选选择特定变体和随后所选结合分子可切换分泌至培养上清液用于生化表征。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 酿酒 酵母 中的 表达 产生 分泌 抗体 方法 | ||
【主权项】：
通过表达、分泌和将其呈递在酵母细胞的表面上而产生多种抗体、生物活性抗体片段或具有特定特性的抗体结构域的方法，其包括以下步骤：(a) 提供酵母种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的宿主细胞，其已经用合适质粒的形式的第一和第二核酸分子转染，其中所述第一核酸分子编码融合蛋白，所述融合蛋白基本上包含细胞表面锚定蛋白、Fc结合结构域和可调节启动子，所述可调节启动子根据培养条件控制所述融合蛋白的表达，并且所述第二核酸分子编码所述抗体群体，所述抗体片段或抗体结构域呈其轻链和重链的形式，并且在永久活性启动子的控制下， (b) 通过在培养基中存在具有> 5,000的分子量的聚乙二醇(PEG)的情况下在酵母细胞中同时共表达多种抗体、抗体片段或抗体结构域而表达所述融合蛋白，其中所述免疫球蛋白分子以及融合蛋白以可溶性形式从酵母细胞分泌，(c) 在所述酵母细胞的表面上呈递多种抗体、抗体片段或抗体结构域，其以非共价形式结合至表达的锚定至细胞表面的融合蛋白的Fc结合结构域，(d) 根据结合至Fc结合结构域的多种抗体、生物活性抗体片段或抗体结构域的期望的不同的表型或结合特性，在结合至融合蛋白或免疫球蛋白分子或其中含有的检测标记的帮助下选择和分离酵母细胞，(e) 在使得可能不或基本不进一步表达融合蛋白的培养条件下在特定选择的酵母细胞群体中表达多种抗体、生物活性抗体片段或抗体结构域，和(f) 从培养基分离具有所选表型或结合特性的多种抗体。
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