[发明专利]核苷酸序列的概率导向分离(PINS)有效
申请号: | 201380073618.4 | 申请日: | 2013-12-20 |
公开(公告)号: | CN105189781A | 公开(公告)日: | 2015-12-23 |
发明(设计)人: | 托马斯·奎斯特;玛丽·尤斯特·米克尔森 | 申请(专利权)人: | 赛普有限责任公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人: | 沈敬亭;李海霞 |
地址: | 卢森堡*** | 国省代码: | 卢森堡;LU |
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摘要: | 本发明涉及一种体外方法,其中逐步地提高含有目标DNA片段的靶核苷酸序列的频率,其通过多轮1)稀释含有目标DNA片段的样品至多个复制品(分离)、2)随机扩增复制品中的DNA(浓缩)、3)在至少一个稀释并扩增的复制品中检测目标DNA片段(选择)并且重复步骤1)~3)直到通过标准的测序技术能够对目标DNA片段进行测序。 | ||
搜索关键词: | 核苷酸 序列 概率 导向 分离 pins | ||
【主权项】:
一种富集来自混合多核苷酸样品的靶DNA分子的体外方法,其包含步骤:a)提供含有所述靶DNA分子的混合多核苷酸样品,其中所述靶DNA分子包含一个或多个至少10个核苷酸的独特连续序列,b)连续稀释所述混合多核苷酸样品直到在稀释样品中检测所述靶DNA分子的概率低于0.75,优选低于0.50或甚至更优选低于0.25,和c)复制足够数量的所述稀释样品直到在复制稀释样品的至少一个中检测所述靶DNA分子的概率为至少0.75,优选0.80~0.95;d)在所述复制稀释样品中扩增所述DNA以提高所述DNA在每个样品中的丰度;e)检测所述靶DNA分子在步骤(d)中扩增的所述复制稀释样品中的存在或不存在,其中所述靶DNA分子在所述复制稀释样品中的频率与步骤(a)中的所述混合多核苷酸样品相比得到了提高;f)连续稀释至少一个含有所述DNA分子的复制稀释样品直到在稀释样品中检测所述靶DNA分子的概率低于0.75,并且重复步骤(c)至(e)或(f)至少一次。
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