[发明专利]用于测量由于非金属化学污染物导致的环境样品中一般毒性及一般毒性的量的体外测试

摘要

一种用于评价环境样品毒性的方法，包括步骤：a)将水性缓冲液与酶碳酸酐酶的水溶液混合；b)将包含二氧化碳(CO₂)或碳酸氢盐(HCO₃^-)的水溶液添加至步骤(a)中获得的混合物以开始碳酸酐酶酶反应；c)通过评价在步骤(b)中获得的混合物随时间的pH变化测定碳酸酐酶的酶活性，所述pH变化是由碳酸酐酶催化的CO₂的水合反应或HCO₃^-的反向脱水反应的指示物；d)在其中没有添加碳酸酐酶水溶液的步骤(a)的缓冲液上重复步骤(b)和(c)的步骤以测量非特异活性；e)在步骤(a)获得的混合物上重复步骤(b)和(c)的步骤，其中，溶液包含已经与待评价其毒性的环境样品提前预孵育的碳酸酐酶；f)计算碳酸酐酶的抑制值(I)作为(i)和(ii)之间的百分比，其中，(i)是在步骤(e)中测得的碳酸酐酶的酶活性与在步骤(d)中测得的非特异活性之间的差值，以及(ii)是在步骤(c)中测得的碳酸酐酶的酶活性与在步骤(d)中测得的非特异活性之间的差值。本发明还涉及用于进行本文中所描述的方法的试剂盒，包括以下组分：水性缓冲液；包含碳酸酐酶的水溶液；包含二氧化碳(CO₂)或碳酸氢盐(HCO₃^-)的水溶液；以及用于测量pH变化的装置。

主权项

一种用于评价环境样品的毒性的方法，包括以下步骤：a)将水性缓冲液与酶碳酸酐酶的水溶液混合；b)将包含二氧化碳(CO₂)或碳酸氢盐(HCO₃^‑)的水溶液添加至步骤(a)中获得的混合物以开始所述碳酸酐酶酶反应；c)通过评价步骤(b)中获得的所述混合物随时间的pH变化测定所述碳酸酐酶的酶活性，所述pH变化是由碳酸酐酶催化的CO₂的水合反应或HCO₃^‑的反向脱水反应的指示物；d)在其中没有添加碳酸酐酶的水溶液的步骤(a)的所述缓冲液上重复步骤(b)和(c)的步骤以测量非特异活性；e)在步骤(a)获得的所述混合物中重复步骤(b)和(c)的步骤，其中，所述溶液包含已经提前与待评价其毒性的所述环境样品预培养的碳酸酐酶；f)计算碳酸酐酶的抑制值(I)作为(i)和(ii)之间的百分比，其中，(i)是在步骤(e)中测得的碳酸酐酶的所述酶活性与在步骤(d)中测得的非特异活性之间的差值，以及(ii)是在步骤(c)中测得的碳酸酐酶的所述酶活性与在步骤(d)中测得的非特异活性之间的差值。