[发明专利]一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因克隆及其表达量检测的方法

摘要

本发明提供了一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因克隆及其表达量检测的方法。在本发明中，通过参照已发表的斑马鱼的钙蛋白酶基因mRNA序列进行引物设计，引物CAST1-F、CAST1-R、CAST2-F、CAST2-R、CAST3-F和CAST3-R用于克隆CAST基因部分编码序列，引物CAST3R1、CAST3R2、CAST5R1以及CAST5R2用于克隆CAST基因5’、3’UTR序列，根据所得到的序列确定出鲤CAST基因的完全cDNA序列，并根据所得到的CAST基因cDNA序列设计引物CASTY_-F以及CASTY-R检测出鲤各组织中CAST基因表达量。

主权项

一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：(1)设计多组引物，分别为：CAST1‑F：5’‑TCAACACCTGCATCTTCTGC‑3’；CAST1‑R：5’‑TTGAGCTGGAGACACAAACG‑3’；CAST2‑F：5’‑CGGATACAGAAAGGAAGACCTG‑3’；CAST2‑R：5’‑AGTATGTCCATCGCATCATCTG‑3’；CAST3‑F：5’‑GAACACAGATGATGCGATGG‑3’；CAST3‑R：5’‑TGATCTGGTGGAAGGGAGTC‑3’；CAST3R1：5’‑GTTTGTCCTGCCTCTAAGTCT‑3’；CAST3R2：5’‑TTCAGTCTGCCGTCTCTGGCCCCC‑3’；CAST5R1：5’‑GGTTGTGATGATGGTAAAGTGC‑3’；CAST5R2：5’‑CCTTATCTTTCAGAGGGTCCGT‑3’；所述CAST1‑F、CAST1‑R、CAST2‑F、CAST2‑R、CAST3‑F和CAST3‑R为克隆CAST基因部分编码序列用引物，所述CAST3R1、CAST3R2、CAST5R1以及CAST5R2为克隆CAST基因5’、3’UTR用引物；(2)以目标生物的RNA为模板，在RT‑PCR过程中加入步骤(1)设计的引物进行反转录PCR、电泳，确定CAST基因部分编码序列、CAST基因5’UTR序列以及CAST基因3’UTR序列，并确定目标生物CAST基因完整序列。