[发明专利]叶酸修饰的纳米钻石靶向药物的制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种叶酸修饰的纳米钻石靶向药物（ND-PEG-FA-DOX）的制备方法以及该方法制得的药物，该药物通过与人肝癌细胞（HepG2）作用，用低温、不同抑制剂和游离叶酸处理细胞，结果表明该药物具有能量依赖，是网格蛋白决定、叶酸受体介导机制进入细胞；用MTT法检测该药物的细胞毒性，表明该药物对癌细胞具有靶向抗肿瘤效应，通过该药物与单独阿霉素对肿瘤细胞的活性影响的实验，表明该药物具有缓释药物特性。因此ND-PEG-FA-DOX既能降低化疗药物对正常细胞的毒副作用，又能提高化疗药物对肿瘤细胞的杀伤力，其可在制备靶向抗肿瘤药物中应用。

主权项

一种叶酸修饰的纳米钻石靶向药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将羧基化的纳米钻石，在70‑80℃真空干燥箱干燥过夜，按每毫克羧基化的纳米钻石加入1‑1.5ml的0.1M、pH5.8的MES缓冲溶液中，超声分散30min形成悬浊液，再按每毫克羧基化的纳米钻石中加入0.2mg EDC与0.28mg NHS，室温搅拌反应6h，以15000rpm离心5min，除去上清液，得到活化羧基的纳米钻石沉淀物；把活化羧基的纳米钻石沉淀物分散到0.1M、pH8.4的硼酸缓冲溶液中，超声分散形成悬浊液；再按每毫克活化羧基的纳米钻石加入0.5mg H2N‑PEG‑NH2，继续室温搅拌反应12h，用0.1M、pH8.4的硼酸缓冲溶液以15000rpm离心5min洗涤3次，再分别用1.5ml乙醇和1.5ml DMSO各离心洗涤2次，获得纳米钻石‑聚乙二醇二胺沉淀物；（2）按每毫克纳米钻石‑聚乙二醇二胺沉淀物溶于1ml DMSO中，超声分散10min，形成悬浊液，将活化的0.12mg叶酸逐滴加入纳米钻石‑聚乙二醇二胺的悬浊液中，并向其中加入15μl三乙胺，在氮气保护下避光搅拌反应12h，得到沉淀物，分别用1.5ml乙醇和1.5mlDMSO以15000rpm离心5min洗涤3次，得到纳米钻石‑聚乙二醇二胺‑叶酸靶向载体ND‑PEG‑FA，放在真空干燥箱里避光保存；（3）按每毫克干燥的ND‑PEG‑FA加入1mL浓度0.1M、pH8.0的硼酸缓冲溶液中，避光超声分散10min形成悬浊液，接着按ND‑PEG‑FA与阿霉素的质量比100：7‑10加入阿霉素，摇匀，避光反应6h；以15000rpm离心5min，用硼酸缓冲溶液洗涤3次，制得叶酸修饰的纳米钻石靶向药物ND‑PEG‑FA‑DOX，真空干燥，冷藏。