[发明专利]一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒

摘要

本发明提供一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，由定量RT-PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、CVA6和CVA10标准品、CVA6和CVA10强阳性对照品、CVA6和CVA10弱阳性对照品、阴性对照品组成。本发明运用一步法实时荧光定量RT-PCR技术，采用CVA6和CVA10高度特异的引物和荧光标记探针，从粪便标本中同时检测出是否有CVA6和CVA10的存在，比单重荧光定量PCR方法更便捷迅速、节约成本。检测实时、准确定量，为临床提供早期诊断，为临床治疗方案的制定提供参考依据；可应用于柯萨奇病毒A6、A10型引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查、临床诊断及手足口病的流行病学的研究。

主权项

 一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，其特征在于，由定量RT‑PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、CVA6标准品、CVA10标准品、CVA6强阳性对照品、CVA10强阳性对照品、CVA6弱阳性对照品、CVA10弱阳性对照品、阴性对照品组成；其中定量RT‑PCR反应液有PCR反应缓冲液、氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐热Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶，引物探针混合液包含CVA6、CVA10两组特异性引物和相应的CVA6、CVA10两种荧光标记的特异性探针，阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水，CVA6、CVA10强阳性对照品和CVA6、CVA10弱阳性对照品为包含CVA6、CVA10的保守区基因序列的阳性质粒样品；特异性引物及特异性探针序列如下：上游引物CVA6‑F: 5’‑ AARCCRGATAGYAGGAAATC‑3’，下游引物CVA6‑R：5’‑ GGGGTGGATCACTCAATTTTG‑3’，特异性探针CVA6‑P: 5’‑FAM‑ CAATGGCAGACTGCYACYAAYCCGTCG‑BHQ1‑3’，上游引物CVA10‑F: 5’‑ GAGACTGGACGYGTRCCA‑3’，下游引物CVA10‑R: 5’‑ GGGTYTCAATCATGTTYTCATCTG‑3’，特异性探针CVA10‑P: 5’‑HEX‑ CAGAGACRGGTGCCACWTCTAAYGCC‑BHQ1‑3’。