[发明专利]一种食品中莱克多巴胺含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种食物中莱克多巴胺含量的检测方法，其特征在于包括下述步骤：制备捕获探针、制备信号探针、对待测样品进行处理、使用血糖仪进行检测。与现有技术相比较，本发明通过酶的催化作用将信号转化为血糖仪可以检测的葡萄糖信号，实现了非糖物质的血糖仪现场检测，具有高稳定性、较低的检测限和较宽的检测范围，且检测成本低，检测程序简单，检测效果好，尤其是一般人员即可在现场进行检测，避免了现有技术中必须专业人员在实验室操作的严苛要求。

主权项

一种食物中莱克多巴胺含量的检测方法，其特征在于包括下述步骤：⑴制备捕获探针：取0.08‑0.12g平均粒径为1μm的Fe₃O₄磁珠分散在60‑100mL乙醇和15‑25mL水的混合液中，在35‑53Hz下超声8‑12min，加入0.8‑1.2mL浓度为26‑30wt%的氨水；随后，逐滴加入1.5‑2.5ml正硅酸乙酯，180‑220rpm机械搅拌，室温下反应10‑14h；通过磁性分离得到的纳米粒子用水和乙醇依次清洗3‑5次，清洗干净溶液中不能被磁铁吸附的悬浮微粒，然后在50‑70℃下真空干燥，得到包裹有二氧化硅层的Fe₃O₄磁珠Fe₃O₄@SiO₂；向180‑220mL无水甲苯中加入0.4‑0.6g Fe₃O₄@SiO₂和1.8‑2.2mL3‑氨丙基三乙氧基硅烷，在100‑140℃下搅拌10‑14h，得到氨基化的Fe₃O₄@SiO₂；向40‑60ml pH7‑7.5的PBS磷酸盐缓冲溶液中加入0.4‑0.6g羧甲基化的β‑环糊精、0.15‑0.25g1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐、0.15‑0.25g N‑羟基琥珀酰亚胺和上述得到的氨基化的Fe₃O₄@SiO₂，搅拌10‑14h进行活化，得到Fe₃O₄@SiO₂‑CD捕获探针；⑵制备信号探针：将0.8‑1.2ml浓度为0.08‑0.12mg/ml的莱克多巴胺抗体Ab加入到0.8‑1.2ml Envision试剂（该名词在网络上查询不到，在教科书上有类似的名词吗）中，3‑5℃下250‑350rpm搅拌0.5‑1h，得到复合物溶液；取0.08‑0.12ml上述复合物溶液加入到2‑3ml胶体金溶液（浓度）中，3‑5℃下搅拌4.5‑5.5h，11000‑13000rpm离心10‑15min后，弃去上清液，将沉淀分散在0.8‑1.2ml pH7‑7.5的PBS缓冲液中，得到Envision试剂（上述上溶液，这里是试剂，是否可统一为试剂）‑抗体‑胶体金复合物；向0.8‑1.2ml上述合成的Envision试剂‑抗体‑胶体金溶液中加入450‑550μL浓度为8‑12mg/ml的蔗糖酶溶液，于3‑5℃下搅拌5‑7h，11000‑13000rpm离心10‑15min后，弃去上清液，所得沉淀分散到0.8‑1.2ml含有0.8‑1.2wt%牛血清蛋白的pH为7‑7.5的PBS缓冲液中，得到Envision试剂‑抗体‑胶体金‑酶复合物，即为信号探针；⑶莱克多巴胺的检测：按常规方法处理待测样品，氮气吹干后用0.8‑1.2mL pH7‑7.5的PBS缓冲液重分散得到待测样品溶液；将捕获探针Fe₃O₄@SiO₂‑CD分散在含有浓度为0.8‑1.2wt%的牛血清蛋白、pH7‑7.5的PBS缓冲液，制备成浓度为0.8‑1.2mg/mL的捕获探针分散液；吸取0.8‑1.2mL所述分散液加入到所述的混合溶液中，室温下振摇1.5‑2.5h进行吸附，磁性分离后用PBS缓冲液冲洗2‑5次；之后加入80‑120μLEnvision试剂‑抗体‑胶体金‑酶复合物，室温下振荡反应25‑35min，磁性分离后所得沉淀物用缓冲液清洗后，加入45‑55μL蔗糖溶液，室温下反应1.5‑2.5h后，磁性分离出沉淀后吸取上层清液用血糖仪检测，记录血糖仪的读数；（4）将得到的读数与标准曲线比对，即可得知所检测物质中莱克多巴胺的浓度。