[发明专利]一种结构特异性沙丁胺醇完全抗原的合成方法

摘要

一种结构特异性沙丁胺醇完全抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明包括如下步骤：2-溴-1-[4-羟基-3-(羟甲基)苯基]乙-1-酮溶解于丙酮，加入碳酸钾后，与二苄基胺反应生成化合物B，在氢化铝锂催化下，生成化合物C，再在Pd/C催化下和氢气生成化合物D，再与乙酰丙酸乙酯还原胺化反应生成化合物E，在碱性条件下水解，并于酸性条件下重结晶后生成沙丁胺醇半抗原，名称为4-((2-羟基-2-(4-羟基-3-(羟甲基)苯基)乙基)氨基)戊酸。将此半抗原上的羧基与载体蛋白上的氨基进行偶联得到完全抗原。实验结果表明，用该完全抗原免疫动物得到的抗血清效价达81000，检测限为0.3ng/mL，半抑制浓度为3.2ng/mL。产生的抗体特异性高、灵敏度高；该抗原或抗体具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种沙丁胺醇完全抗原的合成方法，其特征在于合成路线为：工艺步骤为：（1）沙丁胺醇半抗原的制备：合成一种小分子化合物作为沙丁胺醇半抗原，名称为4-((2-羟基-2-(4-羟基-3-(羟甲基)苯基)乙基)氨基)戊酸，其分子结构式如式I所示：式I；制备步骤：将2-溴-1-[4-羟基-3-(羟甲基)苯基]乙-1-酮溶解于丙酮，加入碳酸钾后，与二苄基胺反应生成化合物B；在氢化铝锂催化下，生成化合物C；再在Pd/C催化下和氢气生成化合物D；再与乙酰丙酸乙酯还原胺化反应生成化合物E；在碱性条件下水解，最后于酸性条件下重结晶后生成式I所示沙丁胺醇半抗原；（2）沙丁胺醇完全抗原的制备：方案A：将沙丁胺醇半抗原，用DMF溶解，与NHS、EDC反应，式I所示化合物:NHS:EDC的摩尔比为1: 1.5: 2，在4℃下、避光搅拌反应1h，再在室温25℃下反应12h；取载体蛋白，沙丁胺醇半抗原与载体蛋白的摩尔比为80:1，用0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解，其中溶解后的蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与DMF的体积比例为5:1；将活化的半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间换液4次，即得到沙丁胺醇完全抗原；或方案B：将沙丁胺醇半抗原，用DMF溶解，与三正丁胺、氯甲酸异丁酯反应，半抗原: 三正丁胺: 氯甲酸异丁酯的摩尔比为1: 1.2: 1.2，0℃反应1h；取载体蛋白，半抗原与载体蛋白的摩尔比为80:1，用 0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解，0℃预冷30min，其中溶解后的蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与DMF的体积比例为5:1；在0℃条件下，将活化的半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，0℃条件下反应1h，然后室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间换液4次，即得到沙丁胺醇完全抗原。