[发明专利]一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法

摘要

本发明公开了一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法。采用方法的要点是将毛竹纳米微晶纤维素配成一定浓度的溶液，分别加入荧光染色剂与细胞增殖与活性检测试剂（CellCountingKit,CCK-8），与细胞共同培养检测其生物相容性。该方法简易、快速、高效，特别适于检测毛竹纳米微晶纤维素的生物相容性。将毛竹纳米微晶纤维素与细胞共同培养，利用CCK-8试剂定量测定细胞在毛竹纳米微晶纤维素中的增殖情况，本发明提供的方法生成产物为水溶性的,不需要后续的溶解过程,可避免因溶解不完全而造成的实验误差，使检测结果更可靠、有效。

主权项

一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将毛竹纳米微晶纤维素配制成浓度0.04 wt%溶液，进行高压灭菌处理，得到经预处理的毛竹纳米微晶纤维素溶液；2）在无菌环境下，将检测细胞在培养基中按传代培养方法消化成单细胞悬浊液，进行细胞计数，以5×10³个/孔向96孔板中加入检测细胞，同时量取步骤1）中得到的经预处理的毛竹纳米微晶纤维素溶液分别加入96孔板，保证每孔溶液总量200 μL，获得毛竹纳米微晶纤维素‑检测细胞混合培养液，放入细胞培养箱中进行培养；3）分别在1、3、5、7天吸取96孔板中的毛竹纳米微晶纤维素‑检测细胞混合培养液，用磷酸缓冲溶液（Phosphate buffer solution, PBS）清洗数次，加入细胞增殖与活性检测试剂（Cell Counting Kit, CCK‑8）和培养基在培养箱中培养2‑6 h，吸取100 μL上清液加入96孔板中, 在450 nm波长采用酶标仪检测其光密度值（Optical density, OD）；4）同时将步骤2）中得到的毛竹纳米微晶纤维素‑检测细胞混合培养液与含有细胞膜绿色荧光探针染料（DiO）的培养基在细胞培养箱中培养10~20 min，吸出培养基并用PBS溶液清洗去除未结合染料，加入1 mL胰酶，制成单细胞悬液，放入细胞培养箱中进行培养，分别在1、3、5、7天利用荧光显微镜观察细胞的增殖情况。