[发明专利]一种基于Caco-2细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性定量评价方法

摘要

一种基于Caco-2细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性定量评价方法，涉及抗氧化剂。利用Caco-2细胞模型，通过优化细胞的接种浓度和培养时间，荧光探针（2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐，简称DCFH-DA）、自由基引发剂（2,2’-偶氮二异丁基脒，简称AAPH）和抗氧化剂纯品与Caco-2细胞的孵育条件，建立一种基于Caco-2单层细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性细胞学定量评价方法，具有生物相关性高、简单、快速的优点，为生物抗氧化剂的研究提供一个有效的分析评价工具。

主权项

一种基于Caco‑2细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性定量评价方法，其特征在于包括以下具体步骤： 1）将100～200L的Caco‑2单细胞悬浮液按1×10⁴～1×10⁵个细胞/孔的浓度接种至透明平底黑色96微孔细胞培养板中培养； 2）将步骤1）的96微孔板中生长培养基移出，用100～200L1×PBS清洗贴壁细胞； 3）用含有20～100M DCFH‑DA的抗氧化剂处理培养基配制6个不同浓度的抗氧化剂溶液； 4）将步骤3）得到的抗氧化剂溶液100～200L加入步骤1）的96微孔板中，记为样品孔，孵育，对照孔和空白孔为只含有20～100M DCFH‑DA的抗氧化剂处理培养基处理的细胞孔，每个样品、对照和空白各3个重复孔； 5）将步骤4）的96微孔板中溶液移出，用100～200L1×PBS清洗贴壁细胞； 6）向步骤5）的样品孔和对照孔中加入100～200L含有200～800M AAPH的氧化剂处理培养基，空白孔加入100～200L氧化剂处理培养基； 7）用荧光酶标仪测定步骤6）中96微孔板中各孔的荧光强度； 8）根据步骤7）做出各样品孔和对照孔荧光强度—时间曲线，计算各种抗氧化剂的细胞学抗氧化活性，用槲皮素作标准品，各抗氧化剂样品的细胞学抗氧化活性值用　mol槲皮素当量/100g（或　mol）样品表示。