[发明专利]一种橙皮苷类免疫亲和柱的制备及其应用

摘要

本发明涉及应用可特异性识别橙皮苷类的抗体来制备一种橙皮苷类免疫亲和柱及其应用，属于食品药品质量控制领域。其目的是将橙皮苷类成分从复杂的基质中分离出来，可以使复杂的前处理方法变得简单，有效去除干扰成分，解决因为基质多样、干扰严重而不能将同一提取净化方法、色谱条件应用于不同制剂和药材的问题。

主权项

一种橙皮苷类免疫亲和柱在检测橙皮苷和柚皮芸香苷中的应用，所述橙皮苷类免疫亲和柱包含有载体和橙皮苷类抗体；所述的载体是琼脂糖凝胶，所述的琼脂糖凝胶包含但不限于溴化氰活化的琼脂糖凝胶、交联的琼脂糖凝胶、聚丙烯酸琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶以及纤维素；所述的橙皮苷类抗体包括单克隆IgG抗体或多克隆抗体；所述橙皮苷类免疫亲和柱制备方法为:1)载体活化取2％的预溶胀的琼脂糖凝胶sepharose4B，用20倍体积的蒸馏水充分冲洗，洗去残存的乙醇，用漏斗过滤掉水分，称取滤去水分后的湿凝胶5克，加入7.5毫升0.8M的NaOH溶液，30％的环氧氯丙烷2毫升，2mg/ml的硼氢化钠5毫升，在25℃下摇床反应8小时，反应后，用大量的蒸馏水洗涤，去除凝胶中混杂的环氧氯丙烷；2)橙皮苷类抗体与琼脂糖凝胶载体连接将抗体连接于琼脂糖凝胶上，将橙皮苷类抗体溶于20mM pH7.4的PBS中，终浓度2mg/ml，将抗体加入用20mM pH7.4的PBS缓冲液洗涤过的凝胶中，室温结合30分钟，结合后的载体用PBS洗涤，连接有抗体的载体命名为抗体—sepharose；3)载体交联将抗体—sepharose用0.1M pH9.0的硼酸缓冲液洗涤3次，然后加入0.1M pH9.0的硼酸缓冲液，在缓冲液中加入交联剂庚二亚氨酸二甲酯至终浓度20mM，室温交联1小时，加入50mM pH9.0的乙醇胺终止反应，并用50mM的乙醇胺封闭10分钟，交联后的抗体—sepharose载体用20mM pH7.4的PBS洗涤3次；4)装柱将交联后的抗体—sepharose载体根据需要装入层析柱中，可根据需要制备不同容量的橙皮苷类免疫亲和柱，放于4℃保存。