[发明专利]一种椰子叶片冷冻切片的制作方法

摘要

本发明涉及一种椰子叶片冷冻切片的制作方法，是取椰子叶片切成小段样品；将纸质长方体粘在底座上，然后将叶片组织样品垂直置于平放在样品托上，再用冷冻包埋剂将样品完全包裹住，并放在样品台上进行冷冻切片；将切片贴到载玻片上，经烤片、染色后加盖玻片，待切片刚刚干燥时即可在显微镜下观察拍照。本发明采用冷冻切片的方式可快速获得结构完整的冷冻切片，可以有效地缩短制片的周期，材料不易变形，且切片显微观察的效果好，有利于较快开展对椰子种质资源的鉴定评价研究，对椰子种质资源的结构观察和分类鉴定具有重要的意义，为培育适合我国大面积栽培的椰子新品种奠定基础。

主权项

一种椰子叶片冷冻切片的制作方法，其特征在于，其步骤如下：1）、材料前处理：取椰子叶片，洗净擦干后迅速用刀片切成2×4mm的小段样品；2）、样品固定：在Leica LM1900冷冻切片机的冷台底座先加l～2滴OCT冷冻包埋剂，用硬质纸做成边长4～6mm、高7～10mm的长方体粘在底座上，然后再将叶片组织样品垂直置于平放在样品托上，再加3～6滴OCT冷冻包埋剂将叶片组织样品完全包裹住，并放在Leica LM1900冷冻切片机中的样品台上，放置10～20min，即可进行冷冻切片；3）、冷冻切片：切掉样品的外面纸盒，把带有椰子叶片的包埋剂块——样品块切成3×5mm的大小；将刀片水平放稳，然后将粘有叶片的冷台固定在冷冻切片机的冷台固定槽上；先将切片厚度调节旋钮调至切片厚度35～50u m对样品块进行修片，待能够出现平整均匀的切片后调至5～7μm，箱体最低控制温度为‑20℃，切片头最低控制温度为‑10℃，摇动旋转手轮进行切片；4）、展片和烤片：将切下来的切片贴到载玻片上，然后进行烤片，烤片时间在20～30min和温度为45℃；5）、染色：把烤好的切片放入1%番红水溶液染色3～8h，然后用蒸馏水洗涤3～5次，放入30%酒精中静置30s～1min，95%乙醇洗涤至切片不褪色后，滴加50%甘油于材料表面，加盖玻片；待切片刚刚干燥时，立即在Leica DMILLED倒置生物显微镜下观察拍照。