[发明专利]利用大肠杆菌表达抗菌肽apidaecin和制备抗菌肽apidaecin的方法

摘要

本发明涉及一种利用大肠杆菌表达抗菌肽apidaecin和制备抗菌肽apidaecin的方法，将AP2基因和多角体基因序列polh克隆入重组载体中形成带有polh‑AP融合基因片段的重组载体；接着polh‑AP融合基因片段克隆入表达载体，将表达载体转化表达宿主细胞，表达宿主细胞经培养表达带有所述抗菌肽AP2的融合蛋白。将表达宿主细胞进行培养，诱导重组蛋白polh‑AP的表达，将诱导后的菌株离心收集，重悬后超声波破碎，离心收集不溶性包涵体，纯化收集重组蛋白样品。与现有技术相比，该表达系统培养程序简单，生产成本低，能高效的表达抗菌肽apidaecin，且使得AP2与polh融合表达，不仅有效降低AP2对大肠杆菌的毒性，提高抗菌肽的稳定性，让抗菌肽高水平表达，且方便纯化处活性抗菌肽，提高抗菌肽apidaecin的产量。

主权项

1.一种利用大肠杆菌表达抗菌肽apidaecin的方法，其特征在于：在如SEQ ID NO.1所述的AP2基因的上游加入羟胺裂解位点编码序列，然后在该基因片段的5’端加入EcoR I，3’端加入Xho I，合成后克隆入所述pUC57，形成带有AP2基因的重组载体pUC57‑AP，然后将BmNPV的多角体基因polh克隆入所述带有AP2基因的重组载体中AP2基因的上游，即形成带有polh‑AP融合基因片段的重组载体pUC57‑polh‑AP；接着polh‑AP融合基因片段克隆入表达载体pET30，得到带有polh‑AP融合基因片段表达载体pET‑polh‑AP，将该带有polh‑AP融合基因片段表达载体转化表达宿主细胞，表达宿主细胞经培养，表达带有所述抗菌肽AP2的融合蛋白；从BmNPV基因组中PCR克隆所述多角体基因polh，PCR克隆的正向引物为带Nco I酶切位点的5’‑AACCCATGGATATGCCGGATTATTCATAC‑3’，反向引物为带EcoR I酶切位点的5’‑TCGTGAATTCATACGCCGGACCAG TG‑3’；所述表达宿主细胞为E.Coli BL21。