[发明专利]利用家蚕细胞表达抗菌肽apidaecin和制备抗菌肽apidaecin的方法

摘要

本发明涉及利用家蚕细胞表达抗菌肽apidaecin和制备抗菌肽apidaecin的方法，化学合成带肠激酶酶切位点的AP2基因，构建重组质粒pFast-His-AP2，该重组质粒转化BmDH10Bac感受态细胞，抽提重组BmBacmid基因，将重组BmBacmid基因转染BmN培养细胞并进行培养的重组病毒，该重组病毒继续感染BmN培养细胞，得带His融合的AP2融合蛋白；将AP2融合蛋白用His亲和层析进行洗脱纯化，然后经浓缩、酶切后得AP2粗制品。与现有技术相比，利用杆状病毒表达系统在家蚕BmN培养细胞表达抗菌肽apidaecin可有效增加表达产量，同时家蚕细胞中有多种天然蛋白质保护剂，可对表达产物进行有效表达，使得基因表达产物十分稳定，提高表达安全性。

主权项

一种利用家蚕细胞表达抗菌肽apidaecin的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）化学合成如SEQ ID NO.1所述的AP2基因，并在该AP2基因的5’端加上肠激酶酶切位点序列，并克隆入pFastBacHta，构建重组质粒pFast‑His‑AP2，该质粒表达His融合的AP2；（2）将步骤（1）所得的重组质粒pFast‑His‑AP2转化BmDH10Bac感受态细胞；（3）经蓝白斑筛选，挑取含有重组Bacmid的白色菌落，抽提重组BmBacmid基因；（4）将步骤（3）所得的重组BmBacmid基因转染BmN培养细胞并进行培养，培养过程中当观察到细胞感染时，将BmN培养细胞培养液离心收集感染上清，得到重组病毒；（5）将步骤（4）所得的重组病毒上清继续感染BmN培养细胞，感染72小时候，分别收集感染BmN培养细胞和培养上清，将收集到的感染BmN培养细胞悬浮于昆虫细胞裂解液，冰上超声裂解，离心取上清得表达产物，该表达产物为带His融合的AP2融合蛋白。