[发明专利]基于AllGlo探针荧光定量PCR的血浆microRNA检测试剂盒及其检测方法

摘要

基于AllGlo探针荧光定量PCR的血浆microRNA检测试剂盒及其检测方法，涉及microRNA。试剂盒设有盒体、隔板、miRNA提取试剂瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶。在200μL血浆充分裂解后加入所述试剂盒中提供的工作浓度为5n mol的血浆miRNA外源性参照，立即进行漩涡震荡15s，其余步骤同常规方法；应用所述试剂盒提供的茎环逆转录试剂将miRNA逆转录为cDNA；应用所述试剂盒提供的实时荧光定量PCR试剂将cDNA进行实时荧光定量PCR扩增；综合分析仪器给出的各项数据，设定合理的阈值和基线，进行分析。其特异性和敏感性高，可快速准确检测样本中miRNA的含量。

主权项

检测三种血浆miRNA的特异引物，其特征在于所述三种血浆miRNA分别是指hsa‑miR‑504、hsa‑miR‑133b、cel‑miR‑39；其中hsa‑miR‑504与hsa‑miR‑133b为人源性miRNA，cel‑miR‑39为线虫来源的miRNA，作为一种外源性参照miRNA，从血浆提取开始加入血浆中，作用在于能够从提取miRNA开始监测整个实时荧光定量PCR的全过程；所述检测三种血浆miRNA的特异引物包括三种血浆miRNA特异性逆转录引物和三种血浆miRNA特异性正向引物；所述三种血浆miRNA特异性逆转录引物由hsa‑miR‑504的特异性逆转录引物、hsa‑miR‑133b的特异性逆转录引物和cel‑miR‑39的特异性逆转录引物组成；所述hsa‑miR‑504的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1 5＇‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACGATAGAGT‑3＇；所述hsa‑miR‑133b的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.2 5＇‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACTAGCTGGT‑3＇；所述cel‑miR‑39的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3 5＇‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCAAGCTGA‑3＇；所述三种血浆miRNA特异性正向引物由hsa‑miR‑504的特异性正向引物、hsa‑miR‑133b的特异性正向引物和cel‑miR‑39的特异性正向引物组成；所述hsa‑miR‑504的特异性正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4 5＇‑GCTGGTTAAGACCCTGGT‑3＇；所述hsa‑miR‑133b的特异性正向引物核苷酸序列为SEQ ID NO.5 5＇‑TAGCGTCTTTGGTCCCCT‑3＇；所述cel‑miR‑39的特异性正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.6 5＇‑CAGAGTCACCGGGTGTAAAT‑3＇。