[发明专利]一种基于数字PCR平台检测基因缺失突变的方法和试剂盒

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体为检测基因缺失突变的方法和试剂盒；以数字PCR为平台，在反应体系中加入与野生型非突变模板序列互补的PNA探针，利用PNA探针的阻遏作用，使得只有发生了缺失突变的样本才能被扩增；并且利用TaqMan探针作为荧光定量标记，根据荧光检测判断样品中是否存在突变的模板及其数量和比例。

主权项

一种基于数字PCR平台检测基因缺失突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备数字PCR混合液：含有待检测基因DNA模板的样品、正向和反向检测PCR扩增引物、标记TaqMan探针、PNA探针、正向和反向质控PCR引物、质控TaqMan探针以及PCR预混液混合，制备得到数字PCR混合液；所述的正向和反向检测PCR扩增引物用于扩增含有缺失突变的基因；所述的标记TaqMan探针与突变位点下游DNA模板结合；所述的质控PCR引物用于扩增待检测的DNA模板的保守序列；质控TaqMan探针与质控PCR引物所扩增的序列结合；标记TaqMan和质控TaqMan探针是连接荧光基团和猝灭基团的核苷酸，两者的荧光基团类型不同；（2）数字PCR混合液制作PCR微反应液滴，再进行PCR扩增反应；（3）收集信号并进行结果判断：对PCR扩增反应后的产物进行信号收集，根据荧光信号的类型判断则待测样品中是否含有发生基因缺失突变的DNA模板及其数量和含量。