[发明专利]一种可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法

摘要

本发明公开一种可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法。本发明中不动杆菌粗酶液先经阴离子葡聚糖凝胶柱纯化，以15～25mM磷酸钠盐缓冲液进行梯度洗脱；再经过阳离子葡聚糖凝胶柱纯化，以10～30mMTris-HCl缓冲液洗脱；再次经阴离子葡聚糖凝胶柱纯化，以15～25mM磷酸钠盐缓冲液进行梯度洗脱，最后得到可降解ZEN毒素的非过氧化物酶酶组分。获得的降解ZEN非过氧化物酶酶组分对真菌毒素玉米赤霉烯酮有较强的降解能力，不需要双氧水的协同作用下，在12h内可降解60%以上的ZEN，为将来研究非过氧化物酶降解ZEN毒素及其应用奠定了基础。

主权项

一种可降解玉米赤霉烯酮毒素的非过氧化物酶酶组分的分离方法，其特征在于包含以下具体步骤： （1）接种1～3%(v/v)不动杆菌Acinetobacter sp.SM04菌悬液到M2培养基中，培养24～48h； （2）将步骤（1）中的液体培养物冷冻离心收取上清液，过滤，滤过液在45～55℃下浓缩8～10倍成粗酶液； （3）将步骤（2）所得的粗酶液加入阴离子型葡聚糖凝胶柱中，用pH7.0、6.5、6.0、5.5、5.0的磷酸钠盐缓冲液进行梯度洗脱，分段收集，测定各管组分的A_280nm值，选取A_280nm≥1.0的收集管进行ZEN降解酶活力测定；合并ZEN降解酶活力高于30%的各管； （4）将步骤（3）获得的ZEN降解酶组分在45～55℃下浓缩8～10倍，加入到阳离子型葡聚糖凝胶柱中，用Tris‑HCl缓冲液以恒定流速洗脱，分段收集，测定各管的A_280nm值，选取A_280nm≥1.0的收集管进行ZEN降解酶活力测定；合并ZEN降解酶活力高于30%的各管； （5）将步骤（4）获得的ZEN降解酶组分在45～55℃下浓缩8～10倍，重新加入到阴离子型葡聚糖凝胶柱中，用pH7.0、6.5、6.0、5.5、5.0的磷酸钠盐缓冲液进行梯度洗脱，分段收集；测定各管组分的A_280nm值；取第二个吸收峰的各管成分进行ZEN降解活力检测；合并ZEN降解活力高于50%的各管； （6）将步骤（5）所得的ZEN降解酶组分在45～55℃下浓缩8～10倍，即为最终的不动杆菌降解ZEN非过氧化物酶酶组分。