[发明专利]一种小鼠肠道菌群失调ERIC-PCR指纹图谱的制备方法

摘要

本发明提供一种小鼠肠道菌群失调的ERIC-PCR指纹图谱的制备方法。所述方法包括抗生素相关性腹泻致小鼠肠道菌群失调造模、提取盲肠内容物DNA、清除盲肠内容物DNA中的腐殖酸、清除盲肠内容物DNA中的PCR抑制物、ERIC-PCR扩增及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE），通过与常规菌群分析结果做比较，从而建立小鼠肠道菌群失调的ERIC-PCR指纹图谱的制备方法。本发明是以纯系小鼠为研究对象，解决传统的细菌培养方法应用于微生物群落分析所带来的不足。该方法可用于实验小鼠肠道菌群失调的快速检测，避免传统的细菌分离培养的操作繁琐、耗时长、工作量大等缺点，能够准确、快速有效地检测小鼠肠道菌群分布状况。

主权项

一种小鼠肠道菌群失调ERIC‑PCR指纹图谱的制备方法，其特征在于：(1)从盲肠内容物标本中提取基因组DNA；(2)所提取的盲肠内容物DNA须用柱式腐殖酸清除剂清除腐殖酸，从而得到纯化的DNA溶液；(3)采用合成引物ERIC1R、ERIC2，取纯化的DNA溶液作为PCR模板，PCR抑制物清除剂加入到PCR反应体系中，进行PCR扩增；取扩增产物用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上样，电泳结束后凝胶采用Syber‑GreenⅠ染色，并立即进行紫外拍照，即得小鼠肠道菌群失调ERIC‑PCR指纹图谱；所述ERIC1R引物的序列为5’‑ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC‑3’，所述ERIC2引物的序列为5’‑AGTAAGTGACTGGGGTGAGCG‑3’；所述PCR抑制物清除剂加入量与PCR总反应体系总量的体积比1：10。