[发明专利]一种月桂酸修饰超氧化物歧化酶的方法

摘要

本发明公开了一种月桂酸修饰超氧化物歧化酶的方法，本方法包括以下步骤：将月桂酸、氯化亚砜和催化剂置于反应器中加热反应，反应结束后蒸馏得到活化后的月桂酸；将牛血Cu/Zn-SOD溶于弱碱性缓冲液中，再加入活化的月桂酸，升温，搅拌60min后浓缩降温，再加入无水乙醇，离心，洗涤后再离心，用透析器透析，收集酶活性部分、透析、超滤、冻干，得到月桂酸修饰的超氧化物歧化酶。采用本方法修饰的月桂酸超氧化物歧化酶，具有酶回收率达到90%以上，无任何有害物质残留，且稳定性高的优势。

主权项

一种月桂酸修饰超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）将100～200ml月桂酸、5～15g氯化亚砜和5～10ml的催化剂吡啶DMF加入到反应器中，加热至90～95℃，搅拌反应1～3小时，再回流1～3小时，（2）回流结束，让反应物进行分馏，减压，除去过量的氯化亚砜，收集146～150℃的馏分，即得到活化的月桂酸，然后再透析、冻干为白色粉末，置于冰箱中保存，（3）取150～250g浓度为4500U/mg的牛血Cu/Zn‑SOD溶于15‑20L弱碱性缓冲液中，在20℃下搅拌溶解，边搅拌边加入40～60ml活化的月桂酸，然后升温至40℃，搅拌60min后，将溶液浓缩至2000～3000ml，然后迅速降温至室温，（4）加入3倍体积量的‑18℃的无水乙醇，用转速为4000r/min进行离心，收集沉淀，将沉淀溶解于1500～2500ml的双蒸馏水，再用4500r/min的转速进行离心，除去不溶物，取上清液通过中空纤维透析器，兑蒸馏水透析，透析液预先用缓冲液平衡好的层析柱层析1.5‑2.5小时，最后收集酶活性部分、透析、超滤、冻干，得到月桂酸修饰的超氧化物歧化酶。