[发明专利]一种改进的茎环引物qRT-PCR检测miRNA的方法有效
| 申请号： | 201410067044.6 | 申请日： | 2014-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN103866009A | 公开（公告）日： | 2014-06-18 |
| 发明（设计）人： | 薛慧慧;肖君华;周宇荀;李凯 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种改进的茎环引物qRT-PCR检测miRNA的方法，包括：（1）miRNA检测引物的设计：茎环引物包括两部分，通用的茎环序列和与靶标miRNA3’端互补配对的特异引物序列，其中与靶标miRNA互补配对的碱基数为11bp；qPCR的下游引物针对通用的茎环序列，上游引物针对靶标miRNA的5’端；在所述上游引物的5’末端增加GC尾巴，以使上下游引物的退火温度相近；（2）将靶标miRNA反转录成cDNA；（3）定量PCR扩增并采用SYBR Green qPCR检测法进行检测。本发明的方法特异性好、灵敏性高，且只需合成一种下游引物，采用SYBR Green I荧光染料法，大大节约了成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 改进 引物 qrt pcr 检测 mirna 方法 | ||
【主权项】：
一种改进的茎环引物qRT‑PCR检测miRNA的方法，包括：（1）miRNA检测引物的设计：茎环引物包括两部分，通用的茎环序列和与靶标miRNA3’端互补配对的特异引物序列，其中与靶标miRNA互补配对的碱基数为11bp；qPCR的下游引物针对通用的茎环序列，上游引物针对靶标miRNA的5’端；在所述上游引物的5’末端增加GC尾巴，以使上下游引物的退火温度相近；（2）采用步骤（1）设计的miRNA检测引物将靶标miRNA反转录成cDNA；（3）定量PCR扩增并采用SYBR Green qPCR检测法进行检测。
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