[发明专利]一种sgRNA片段及其应用

摘要

本发明公开一种sgRNA片段，其DNA序列包括一段固定序列和一段DNA识别序列。sgRNA可识别目的基因上的双链上的不同靶位点，可与一种核酸酶结合并通过识别靶位点处PAM序列，引导核酸酶结合到目的基因靶位点处，并开始进行随机剪切，随后从切口处脱落，形成DSB缺口，随后细胞通过非同源末端连接修复机制修复目的基因双链，造成移码突变，最终目的基因被敲除。本发明还公开了一种基因定点改造方法。本发明还公开了一种基因打靶试剂盒。本发明阐述了可用于小鼠Myod1基因的一系列sgRNA，其打靶效率高，构建时间短，费用低廉，可高效的应用于小鼠Myod1基因打靶。

主权项

一种sgRNA片段，其特征在于，所述sgRNA片段的DNA序列包括一段固定序列和一段DNA识别序列，其中，所述DNA识别序列是可与目的基因两条链中的一条链碱基互补的DNA序列，所述固定序列为GTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTT GAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCT。