[发明专利]一种纳豆激酶高效表达的方法及其用途无效
| 申请号： | 201410068833.1 | 申请日： | 2014-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN103923896A | 公开（公告）日： | 2014-07-16 |
| 发明（设计）人： | 邱东茹;阮晶;洪峰 | 申请（专利权）人： | 武汉万密斋养生堂科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/56 | 分类号： | C12N9/56;C12N15/75;C12R1/125 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种纳豆激酶高效表达的方法及其用途，其特征在于：运用基因工程技术构建高效表达质粒，优化工程菌发酵条件实现纳豆激酶的低成本、高活性、高产量生产。用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽+成熟肽纳豆激酶原基因，构建重组表达质粒pBE2S-Pro-NK，转化重组质粒到枯草芽孢杆菌WB600菌株后取培养液，用硫酸铵分级沉淀法纯化分泌到培养液中的纳豆激酶，经聚丙烯酰铵凝胶电泳SDS-PAGE成单一条带，经纤维平板法检测出现透明圈，得到有活性的纯度较高的纳豆激酶。这些方法可以用于工业化生产用于生产纳豆激酶胶囊、纳豆激酶肠溶片和注射针剂。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 激酶 高效 表达 方法 及其 用途 | ||
【主权项】：
一种纳豆激酶高效表达的方法，其特征在于：纳豆激酶高效表达的方法是，运用基因工程技术构建高效表达质粒，优化工程菌发酵条件实现纳豆激酶的低成本、高活性、高产量生产，用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽+成熟肽纳豆激酶原基因，构建重组表达质粒pBE2S‑Pro‑NK，转化重组质粒到枯草芽孢杆菌WB600菌株后取培养液，用硫酸铵分级沉淀法纯化分泌到培养液中的纳豆激酶，经聚丙烯酰铵凝胶电泳SDS‑PAGE成单一条带，经纤维平板法检测出现透明圈，得到有活性的纯度较高的纳豆激酶。
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