[发明专利]一种植物内生真菌布雷正青霉菌F4a及其应用

摘要

本发明涉及微生物技术领域，具体为一种新的植物内生真菌及其制备布雷菲德菌素A（brefeldin A，BFA）的应用。植物内生真菌为布雷正青霉菌F4a（Eupenicillium brefeldianum F4a），于2012年12月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC M2012531。本发明提供了布雷正青霉F4a能产生高含量的BFA，最高发酵产量达1.9g/L；还提供了通过HP20固相萃取和快速硅胶柱色谱或纯结晶技术制备获得高纯度的BFA。该方法生产成本低，且大大减少有机物的处理和污染，该发明具有良好的工业化前景。所制备的BFA具有抗真菌和杀虫活性，是理想的兽用或农用候选药物。

主权项

一种利用植物内生真菌布雷正青霉菌F4a制备布雷菲德菌素A的方法，其特征在于：1)将布雷正青霉菌F4a发酵种子液按照体积比1:10‑1:20接种于PSB发酵培养基，28℃培养7‑15d；2)将上述所得发酵液采用4‑6层纱布过滤，固液分离得到上清液及菌丝体；过滤上清液采用HP20大孔吸附树脂固相萃取，用70‑100％乙醇洗脱获得粗提物；菌丝体经丙酮提取得提取物；合并两部分提取物减压浓缩后进一步经MeOH精制得到BFA含量超过50‑65％的粗提取物；3)将上述粗提取物用减压快速硅胶柱色谱法分离，使用49:1‑0:10(v/v)二氯甲烷/甲醇溶剂系统进行梯度洗脱，收集体积百分比为47:3‑44:6的二氯甲烷/甲醇洗脱液，即得纯度为90‑99％的布雷菲德菌素A；或，将所述粗提取物通过丙酮溶解，常温下过夜，即得纯度为90‑99％的布雷菲德菌素A；植物内生真菌为布雷正青霉菌F4a(Eupenicillium brefeldianum F4a)，于2012年12月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC M 2012531；所述PSB培养基为：20.0g蔗糖，200g土豆浸出液，用蒸馏水配平至1L，pH 5.0～8.0，115℃灭菌30min。