[发明专利]一种前列腺小体外泄蛋白抗原及其抗体与应用

摘要

本发明涉及一种前列腺小体外泄蛋白抗原、与其特异对应的抗体及应用，并以此为基础进一步得到基于前列腺小体外泄蛋白定量的间接酶联免疫吸附的试剂盒，以有效用于检测和诊断慢性前列腺炎。该基于PSEP抗体‑抗原反应的尿液检测试剂盒经反应体系的精密度检测，稳定性试验，破坏性检验其试剂质量都显示高度可批量生产。其应用是真正非侵入性的，易于操作，简便，并且具有高灵敏度和特异性。它将不仅减轻由于慢性骨盆疼痛综合征/慢性前列腺炎的病者痛苦，而且早期诊治将会进一步加强对前列腺癌的防治，具有广泛的应用前景。

主权项

一种前列腺小体外泄蛋白抗原，其特征在于，采用如下方法制备而成：取500毫升慢性前列腺炎症病人晨尿中段尿，加入等量pH7.3的HEPES缓冲液和蛋白酶抑制剂, 用纱布过滤；取过滤液分别置于10只50毫升离心管，在4°C低温下400g离心10分钟，去沉淀，取上清液在4°C低温下10,000g离心20分钟，去沉淀，取上清液分别置于200只3毫升超速离心管，在4°C低温下100，000g离心120分钟；倒去上清液，取沉淀加入2.5毫升pH7.8的TBS缓冲液和蛋白酶抑制剂, 混匀；在4°C低温下100，000g离心120分钟，倒去上清液，取沉淀分别溶于2.5毫升0.5 % NP‑40，80mM NaCl, 0.2% Deoxycholate, 50 mM Tris, pH 8.0和蛋白酶抑制剂；在4°C低温下100，000g离心20分钟；取上清液，上样TSKgel G3000PW， 280纳米读数，取在40kDa区域峰值蛋白，‑80°C冷冻保存，即得。