[发明专利]犬瘟热和犬冠状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种用于犬瘟热和犬冠状病毒双重PCR检测试剂盒和用于犬瘟热和犬冠状病毒快速鉴别检测的双重PCR方法。根据犬瘟热病毒和犬冠状病毒的基因组序列各设计一对PCR引物，可以扩增出相对应的特异性片段，实现对犬瘟热病毒和犬冠状病毒的检测与鉴别。本发明利用双重PCR技术，单管同步检测犬瘟热病毒和犬冠状病毒，降低了对犬瘟热病毒和犬冠状病毒的检测成本和工作量，实现了对犬瘟热病毒和犬冠状病毒的鉴别检测。本发明建立了一种特异性强、灵敏度高、节时省力并且易于观察结果的双重PCR方法，操作简便，特异性强、灵敏度高、可重复性高，且没有复杂的后处理。

主权项

一种犬瘟热和犬冠状病毒双重PCR检测试剂盒，其特征是:它包括Mix PCR反应液管、阳性对照管、阴性对照管和灭菌去离子水管，其中: 所述Mix PCR反应液管由以下反应液组成: 序列为SEQ ID N0.1的10 mmol/L的上游引物0.5 μ L ； 序列为SEQ ID N0.2的10 mmol/L的下游引物0.5 μ L ； 序列为SEQ ID N0.3的10 mmol/L的上游引物0.5 μ L ； 序列为SEQ ID N0.4的10 mmol/L的下游引物0.5 μ L ； 10XPCR buffer 缓冲液 2.5 μ L ； 25 mmol/L MgCl2 2 μ L ； 10 mmol/L dNTP 1 μ L ； 5U/ μ L Taq DNA 聚合酶 0.3 μ L ； 灭菌水14.2 μ L ； 合计22 μ L,为单次反应的用量； 所述阳性对照管:管内为犬瘟热病毒和犬冠状病毒各自的重组质粒，比例为1:1，2 μ L〜20 μ L，其DNA.序列如下:    犬瘟热病毒重组质粒PMD18‑T‑CDV的DNA序列为SEQ ID N0.5 ；   犬冠状病毒重组质粒PMD18‑T‑CCV的DNA序列为SEQ ID N0.6 ；    所述阴性对照管:管内为无犬瘟热病毒和犬冠状病毒感染的犬肌肉组织DNA样品，2 μ L      〜20 μ L ; 所述灭菌去离子水管:1〜2mL。