[发明专利]重组犬流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗

摘要

本发明公开了一种重组犬流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗。该重组犬流感病毒包含：H3N2亚型犬流感病毒的HA和NA基因，以及H9N2禽流感病毒的PB2、PB1、PA、NP、M和NS六个内部基因。本发明的一种犬流感重组病毒毒株、命名为rH3N2-DL，该毒株的保藏号为CGMCC No.8162。本发明还公开了该犬流感重组病毒的制备方法以及由其制得的疫苗。与亲本株相比，本发明的犬流感重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均能产生很高的病毒滴度和血凝效价。动物实验结果表明由本发明的犬流感重组病毒制得的疫苗具有良好的免疫原性和保护效力。

主权项

一株重组犬流感病毒（Canine influenza virus），其特征在于所述的重组犬流感病毒是通过以下方法制备得到的：（1）将H3N2亚型犬流感病毒的HA基因插入到流感基因转录/表达双向载体中，获得含犬流感病毒HA基因的重组质粒；（2）将H3N2亚型犬流感病毒的NA基因插入到流感基因转录/表达双向载体中，获得含犬流感病毒NA基因的重组质粒；（3）将H9N2亚型禽流感病毒的六个内部基因PB2、PB1、PA、NP、NS和M分别插入到流感基因转录/表达双向载体中，分别获得含有各基因的重组质粒；（4）将以上获得的8个重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞共培养细胞单层，转染后的细胞经培养后，反复冻融3次，使细胞裂解，释放出病毒粒子，将含有细胞裂解物的培养液离心后，取上清液接种SPF鸡胚，培养2‑3天后，取鸡胚尿囊液，检测其血凝活性，获得重组犬流感病毒。