[发明专利]ESAT6-CFP10抗体的制备方法及其应用在审
申请号: | 201410091350.3 | 申请日: | 2014-03-07 |
公开(公告)号: | CN103833849A | 公开(公告)日: | 2014-06-04 |
发明(设计)人: | 张海;师长宏;赵勇;张彩勤 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第四军医大学 |
主分类号: | C07K16/12 | 分类号: | C07K16/12;G01N33/577;G01N33/569 |
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地址: | 710032 陕西省西安市*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明公开了一种ESAT6-CFP10抗体的制备方法,包括如下操作步骤:抗原ESAT6-CFP10对纯种BALB/c小鼠进行免疫处理,制备脾细胞悬液待用;取对数生长的SP2/0骨髓瘤细胞与步骤S1中制得的脾细胞按1∶5的比例混合,加入PEG溶液,SP2/0骨髓瘤细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞并进行选择培养;在步骤S2选择培养期间检测ESAT6-CFP10抗体,筛选出所需要的杂交瘤细胞,在小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞进行增殖,腹水经纯化后获得抗ESAT6-CFP10抗体。本发明利用ESAT6和CFP10蛋白制备抗ESAT6-CFP10融合蛋白单克隆抗体,将ESAT6-CFP10抗体作为诊断结核病的试剂,其可直接对结核患者进行诊断和筛查。 | ||
搜索关键词: | esat6 cfp10 抗体 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】:
一种ESAT6‑CFP10抗体的制备方法,其特征在于,包括如下操作步骤:S1:抗原ESAT6‑CFP10对纯种BALB/C小鼠进行免疫处理,无菌操作取出脾脏,制备脾细胞悬液待用;S2:取对数生长的SP2/0骨髓瘤细胞与步骤S1中制得的脾细胞按1∶5的比例混合,加入PEG溶液,SP2/0骨髓瘤细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞并采用HAT选择培养液进行选择培养,HAT选择培养液维持7~10天后换用HT培养液,再维持2周,改用一般培养液培养;S3:在步骤S2选择培养期间检测ESAT6‑CFP10抗体,筛选出所需要的杂交瘤细胞,上述杂交瘤细胞接种小鼠腹腔,腹水经纯化后获得抗ESAT6‑CFP10抗体。
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