[发明专利]用于肺癌早中期快速诊断试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种用于肺癌早中期快速诊断试剂盒，所述捕获抗体包括半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21‑1和人类天冬胺酰基β－羟化酶分别制得的单克隆抗体；所述试剂盒还包括检测抗体，所述检测抗体包括半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21‑1和人类天冬胺酰基β－羟化酶分别制得的HRP标记后的多克隆抗体。本发明的有益效果如下具有灵敏度高准确性强的特点，其灵敏度及准确性均达到90%以上，另外可以有效降低检测成本、减少操作步骤和降低检测误差。

主权项

用于肺癌早中期快速诊断试剂盒的制备方法，其特征于，其包括以下步骤：(1)抗原的制备：将半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21‑1及人类天冬胺酰基β－羟化酶的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到所需的抗原；(2)捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体；(3)检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体，对所述多克隆抗体进行HRP标记；(4)捕获抗体包被：①.用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为1μg/ml的捕获抗体包被微量滴定板的孔；②.封盖微量滴定板并在4℃下孵育过夜；③.弃去包被液，并用洗涤液洗涤微量滴定板两次，每次在微孔中加入200μl PBST，除去洗涤液和剩余的液滴，晾干放于4℃环境中；(5)封闭：每孔添加200μl封闭缓冲液，封闭包被孔中剩余的蛋白质结合位点。