[发明专利]一种检测细胞凋亡的HSV1-TK分子影像探针及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201410098159.1 | 申请日： | 2014-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN103834740A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 王福;王琰;武文娇;夏玉琼;曾琦;梁继民;田捷 | 申请（专利权）人： | 西安电子科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/02;C12N15/66;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 710071*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测细胞凋亡的HSV1-TK分子影像探针及其构建方法和应用。本发明提供的HSV1-TK探针的制备方法，其步骤包括：（1）用限制性内切酶HindIII和XhoI酶切载体pcDNA3.1，使其线性化；（2）PCR扩增DnaE的C端，TK基因的C端，DEVD序列，TK基因的N端，蛋白内含子DnaE的N端；（3）通过基因重组技术将各个片段按一定顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组；（4）重组载体经过转化、提取质粒、酶切鉴定，获得HSV1-TK探针。本发明的分子影像探针可以活体监测细胞凋亡的发生发展，克服了电子显微镜或流式细胞术等技术只能在离体水平观察细胞凋亡的缺点，为活体监测提供了一个有利工具。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 细胞 hsv1 tk 分子 影像 探针 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种检测细胞凋亡的HSV1‑TK分子影像探针的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）用限制性内切酶HindIII和XhoI酶切载体pcDNA3.1，使其线性化；（2）PCR扩增蛋白内含子DnaE的C端DnaEc、TK基因的C端TKc、TK基因的N端TKn、DnaE的N端DnaEn，以及公司化学合成DEVD序列，其序列为5’‑gatgaagtcgac‑3’；（3）通过基因重组技术将上述各个片段DnaEc、TKc、DEVD、TKn、DnaEn依次与线性化的pcDNA3.1载体重组；（4）重组载体经过转化、提取质粒、酶切鉴定，获得HSV1‑TK探针；HSV1－TK探针的第76位、266位和276位氨基酸位点为插入DEVD的位点。
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