[发明专利]一种大竹蛏微卫星标记的4重PCR检测方法

摘要

本发明涉及一种大竹蛏微卫星标记的4重PCR检测方法，包括：（1）样品采集和DNA制备；（2）微卫星引物的合成；（3）PCR扩增；（4）产物检测。本发明建立了进行大竹蛏家系和亲子鉴定的4重PCR反应体系，实现了在一个PCR反应中同时检测4个微卫星位点，因此与原有的PCR方法相比效率提高了4倍；本发明具有高效、经济、简便易行等特点，可以在大竹蛏种群遗传结构分析、亲缘关系比较、种质鉴定、家系培育与管理以及良种选育中进行推广应用。

主权项

一种大竹蛏微卫星标记的4重PCR检测方法，包括：（1）样品采集和DNA制备：剪取大竹蛏的腹足，采用传统的酚氯仿法提取基因组DNA；（2）微卫星引物的合成：通过磁珠富集法构建大竹蛏微卫星富集文库，克隆测序其中的微卫星序列，用Primer5软件设计大竹蛏不同位点的微卫星正反向引物并合成；所述的正反向引物如下：SgSSR1017‑F：ATAAAATGGTGAGGGTTG；SgSSR1017‑R：AACTTCACACAAAATAACTGCTA；SgSSR0804‑F：TCATCTACCATCCCACCC；SgSSR0804‑R：CTTTATTCAGTTTTCCTACGCT；SgSSR1123‑F：TCAACCTATGTTACCCTTATAC；SgSSR1123‑R：CTTCAGTTAGATTAGGAGCA；SgSSR1103‑F：TTTCAGTAATAAAGCGACC；SgSSR1103‑R：AACTCTGGTAAGAAGGATTG；（3）PCR扩增：运用优化好的PCR扩增体系和扩增程序对不同大竹蛏个体进行4重PCR扩增；（4）产物检测：PCR扩增产物先用2%的琼脂糖凝胶进行电泳，在凝胶成像系统中依据条带的亮度判断扩增产物的有无或扩增量的多少，然后用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行不同个体的基因分型，明确判断不同个体在每个位点扩增等位基因的大小。