[发明专利]一种双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种双菌株联合发酵生产L‑缬氨酸的方法，采用两种菌株，其中一种菌体活力高产酸能力强，一种副产杂酸少；分别将两种菌株进行种子扩大培养；将产酸能力强的菌株进行发酵培养；到活力下降后将副产杂酸少的菌株接入发酵液，并补加营养液后继续发酵；采用液相色谱法检测缬氨酸含量及氨基酸纯度。通过双菌株的联合发酵使发酵液纯度和产酸都有所提高。

主权项

一种双菌株联合发酵生产L‑缬氨酸的方法，采用两株缬氨酸生产菌联合发酵生产，其特征在于：两株缬氨酸生产菌分别是黄色短杆菌和重组大肠杆菌；发酵生产缬氨酸的步骤如下：(1)将黄色短杆菌接种于种子培养基上，进行种子扩大培养得种子液；(2)将重组大肠杆菌接种于种子培养基上，进行种子扩大培养得种子液；(3)将步骤(1)培养的种子液接入灭好菌的发酵培养基中发酵得发酵液，发酵至菌体活力下降，发酵过程补加糖液；(4)将步骤(2)培养的种子液接入步骤(3)中的发酵液中，并补加营养液，继续发酵；步骤(1)中培养条件是，培养温度为30±5℃，培养时间16‑24小时，控制全过程的氧溶解饱和度大于20％；步骤(2)中培养条件是，培养温度为37±5℃，培养时间12‑18小时，控制全过程的氧溶解饱和度大于20％；所述黄色短杆菌为渗漏缺陷型:XQ6Leul,Ilel,AHVr,α‑ABhr,2‑TAhr，所述重组大肠杆菌为L‑亮氨酸和L‑异亮氨酸营养缺陷型；所述步骤(4)的营养液由下述方法配制而来：酵母膏9g、磷酸85％2.4ml、氯化钾2g、L‑异亮氨酸0.3g，定容100ml，121℃灭菌20分钟。