[发明专利]人表皮干细胞的分离与培养方法

摘要

本发明属于病理学技术领域，具体涉及人表皮干细胞的分离与培养方法。本发明要解决的技术问题是为人表皮干细胞的分离与培养提供一种新选择。本发明的技术方案是人表皮干细胞的分离与培养方法，包括如下步骤：a、消毒；b、分离表皮与真皮；c、收集；d、培养；e、传代。本发明方法可将人表皮干细胞至少能传到8代，极大提高了细胞扩增倍数。

主权项

人表皮干细胞的分离与培养方法，其特征在于：包括如下步骤：a、消毒：将包皮环切术取下的人包皮组织用0.5%碘伏浸泡1～2min，PBS漂洗至肉眼观察不再有碘伏着色；b、分离表皮与真皮：修剪掉皮下脂肪组织，组织修剪为约为0.5cm×1cm大小的皮片；加入0.25%的中性蛋白酶Ⅱ溶液充分覆盖组织块，4℃消化l2～16h；弃中性蛋白酶Ⅱ溶液，PBS清洗后用眼科镊子分离表皮与真皮，得到表皮组织；c、收集：剪碎表皮组织，加入0.25%胰蛋白酶溶液消化5～10min，终止消化，过滤，离心，PBS洗涤，收集细胞；d、培养：用K‑SFM培养液将收集的细胞制成2.5×10⁵个/mL的单细胞悬液，接种单细胞悬液于包被了IV型胶原的培养器皿中，37℃静置10min；弃未贴壁细胞，用PBS漂洗，加入K‑SFM培养液；37℃、5%CO₂培养；次日更换细胞培养液，继续培养，每2天换液1次；e、传代：待细胞生长密度为70～80%时，用0.25%胰蛋白酶消化，终止消化，离心，收集细胞，按细胞接种面积扩大4～6倍传代；上述所有操作均在无菌条件下进行。