[发明专利]一种林蛙皮胶原蛋白微粉的制备方法

摘要

本发明公开了一种以林蛙皮为原料制备胶原蛋白微粉的方法。该方法以林蛙皮为原料，提取出胶原蛋白后，使用温和溶剂，不添加任何高聚物，将其溶解于醋酸之中进行电纺，制备出林蛙皮胶原蛋白微粉，该微粉的粒径范围为200nm—3000nm，颗粒体积小且粒度均匀，安全无毒，易于被人体皮肤吸收。由此克服了现有技术中胶原蛋白提取原料复杂，难以保证安全性，以及因胶原蛋白粉颗粒体积较大而不易被人体组织吸收的缺点。根据本方法制备的林蛙皮胶原蛋白微粉，可作为生物活性原料添加于各类生物医疗无纺布及美容产品当中，发挥其独特的修复和美白功能。

主权项

一种林蛙皮胶原蛋白微粉的制备方法，其特征为步骤如下：（1）林蛙皮胶原蛋白肽的制备①脱色：称取干燥林蛙皮，用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/L的NaOH水溶液和1%w/vH₂O₂水溶液的混合溶液中浸没静置，其中NaOH水溶液与H₂O₂水溶液的体积比为1～3:1，搅拌，每2～4h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将林蛙皮用蒸馏水清洗，于25～45℃烘干；②脱脂：将烘干后的林蛙皮放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌2～3d，期间每3‑4h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去林蛙皮上的残余脂肪；③酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的林蛙皮放入0.5～1mol/L乙酸水溶液中，林蛙皮与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.000‑3.500NFU/mg的胃蛋白酶，林蛙皮与胃蛋白酶的质量比为20～100:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌24～96h，得林蛙皮的酸酶提取液；④乙二胺四乙酸灭酶活：向林蛙皮的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中林蛙皮与乙二胺四乙酸质量比为33～167:1，静置1～10h；⑤离心：将静置后的林蛙皮酸酶提取液离心10～30min，转数为4000～10000r/min，合并收集上清液；⑥盐析：向上述上清液中加入NaCl，使NaCl浓度为4～5mol/L，搅拌12～24h后，静置12～24h，以转数5000～10000r/min离心20～40min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液中，其中每1L缓冲溶液中含有NaCl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入HCl调节PH值至7.2～7.6，且林蛙皮与缓冲溶液的质量体积比为1:20～50g/mL，向上述缓冲溶液加入NaCl，使NaCl的浓度为1.7～2.4mol/L，静置12h，以转数5000～10000r/min，离心30～60min，得沉淀；⑦透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且林蛙皮与乙酸水溶液的质量体积比为1:10～50g/mL，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析3～7d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；⑧聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；⑨冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得林蛙皮胶原蛋白肽；（2）林蛙皮胶原蛋白微粉的制备①取林蛙皮胶原蛋白肽制成浓度为0.05～0.10g/ml的醋酸溶液，搅拌12h；②调节静电纺丝条件中的电压至15～20V、纺丝距离10～15cm、纺丝速度1～2ml/h，电纺得林蛙皮胶原蛋白纤维膜，用砂纸将该纤维膜从锡箔打磨下来，收集得林蛙皮胶原蛋白微粉。