[发明专利]无机纳米材料层状双氢氧化物在小鼠胚胎干细胞培养中的应用

摘要

本发明涉及一种无机纳米材料层状双氢氧化物在小鼠胚胎干细胞培养中的应用。利用纳米层状双氢氧化物能够在不添加LIF因子的情况下，促进各多能性基因的表达，抑制细胞分化，并且处理后的细胞仍然具有向三个胚层分化的潜能。纳米层状双氢氧化物具有良好的生物相容性，低细胞毒性，易于接触细胞表面等特点，成本低廉，材料合成便捷，作用效果佳，为胚胎干细胞研究带来广泛的应用前景。

主权项

一种无机纳米材料层状双氢氧化物在小鼠胚胎干细胞培养中的应用，其特征在于具体步骤如下：(1)利用水热法，制备纳米层状双氢氧化SLW‑1；配制Mg(NO3)2·6H2O 1.536 g, 0.006mol 和Al(NO3)3·9H2O 0.75 g, 0.002 mol的金属混合盐溶液共40ml，水作为溶剂，配制0.016mol NaOH溶液；N2气氛下，将金属混合盐溶液加入到剧烈搅拌NaOH溶液中，所得悬浮液转至水热合成釜，在100℃下18h后取出，获得粒径大小为100‑120nm的SLW‑1悬浮液；(2)通过差速贴壁法将正常培养的小鼠胚胎干细胞去除饲养层MEF细胞，按照2×104个/孔接种在铺有1%明胶的六孔板上，采用完全培养基培养24小时后，去除LIF因子，并在培养液中加入不同浓度的步骤(1)得到的SLW‑1悬浮液培养4天；所述完全培养基的原料组成为：高糖DMEM；15％胎牛血清；0.1mmol／L非必需氨基酸；2mmol／L谷氨酰胺；0．1mmol／Lβ‑巯基乙醇；1000U／ml白血病抑制因子；(3)通过碱性磷酸酶染色、检测多能性基因以及内胚层、中胚层和外胚层三个胚层的标志分子的表达量，显示SLW‑1能够促进mESC的自我更新力，抑制其分化；经SLW‑1处理后的mESC能够形成拟胚体，并向三个胚层进行分化，说明该细胞仍具有多潜能性。