[发明专利]一种褐色脂肪组织中解偶联蛋白-1分离纯化的方法有效
| 申请号： | 201410142806.4 | 申请日： | 2014-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN103923205A | 公开（公告）日： | 2014-07-16 |
| 发明（设计）人： | 朱万龙;王政昆;张浩;高文荣;郑佳;孙舒然 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种褐色脂肪组织中解偶联蛋白-1分离纯化的方法，通过将试验动物的褐色脂肪组织用提取液A混合研磨，离心去上层脂肪，取一次上清液；将所述一次上清液离心去沉淀，取二次上清液；将二次上清液离心取一次沉淀，将一次沉淀与提取液B混匀，20kHz条件下超声处理，将超声后的溶液离心取二次沉淀；将二次沉淀与提取液B混匀，加入TritonX-100混匀，20kHz条件下超声处理，将超声后的溶液在离心取三次上清液；将三次上清液装柱、洗脱纯化，得到解偶联蛋白-1。本发明的纯化效果较好，成本低，非常适合实验室采用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 褐色 脂肪 组织 中解偶联 蛋白 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种褐色脂肪组织中解偶联蛋白‑1分离纯化的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）采集试验动物的褐色脂肪组织，将所述褐色脂肪组织与提取液A按质量体积比为1g：5ml混合研磨，在1500g、4℃条件下离心10min，去掉上层脂肪，取一次上清液；将所述一次上清液在500g、4℃条件下离心5min去掉沉淀，取二次上清液；（2）将所述二次上清液在10000g、4℃条件下离心10min，取一次沉淀，将所述一次沉淀与提取液B按质量浓度为1：5混匀，20kHz条件下超声处理，将超声后的溶液在10000g、4℃条件下离心30min，取二次沉淀；（3）将所述二次沉淀与提取液B按质量体积比为1g：2.5ml混匀，加入与步骤（2）所述提取液B等体积的体积浓度为5%的TritonX‑100混匀，20kHz条件下超声处理，将超声后的溶液在10000g、4℃条件下离心30min离心，取三次上清液；（4）将所述三次上清液装柱、洗脱纯化，得到解偶联蛋白‑1；在上述步骤中，所述提取液A的pH7.4，包括10mmol/LTrisbase、250mmol/L蔗糖以及2mmol/LEDTA；所述提取液B的pH6.7，包括20mmol/LMOPS、20mmol/LNa2SO4以及2mmol/LEDTA。
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