[发明专利]一种倭蜂猴粪便DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种倭蜂猴粪便DNA提取方法，取-20℃冷冻保存的粪便，加入1ml无水乙醇，振荡混匀，倾去上清液，重复3-5次至上清无异色；加1ml无菌双蒸水混匀，倾去上清液，重复3-5次至上清无异色；加500ul1％SDS水浴10min；离心5min；转移上清液；加等体积的酚25：氯仿24：异戊醇1；取上清液，加醋酸钠、无水乙醇，-20℃放置20min，沉淀DNA，倾去上清，加酒精洗涤DNA，离心，室温下自然晾干，加适量无菌双蒸水，-20℃保存。本发明具有提取DNA分子量大，成功率高的特点，适合推广应用。

主权项

一种倭蜂猴粪便DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：①称取0.05g‑0.10g在‑20℃下冷冻保存的粪便，放入灭菌的2ml离心管中，加入1ml无水乙醇，振荡混匀1min，4℃10000r/min离心3min，倾去上清液，重复3‑5次至上清无异色；②加入1ml无菌双蒸水混匀，4℃10000r/min离心3min，倾去上清液，重复3‑5次至上清无异色；③加入500ul1％SDS，振荡混匀，55℃水浴10min，其间每3‑4min取出混匀；④取出离心管，4℃10000r/min离心5min；⑤将上清液转移到另一个新的2ml离心管中，加入30ul0.5mol/LEDTA，20mg/ml的蛋白酶K10ul，振荡混匀，55℃水浴消化30min‑1h；⑥取出离心管加入等体积的酚25：氯仿24：异戊醇1，于10000r/min条件下抽提10min，取上清液；重复抽提2‑3次；⑦吸取约450ul上清液至一新的2ml离心管中加入1/10体积的3mol/L醋酸钠，1ml无水乙醇，‑20℃放置20min，4℃12000r/min离心10min以沉淀DNA，倾去上清，加入500ul70%酒精洗涤DNA，12000r/min离心2min，室温下自然晾干，加入无菌双蒸水，‑20℃保存。