[发明专利]一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法

摘要

本发明涉及一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法，属于核酸纯化领域。首先向肝素制品中加入特异性的裂解结合液，待充分裂解结合后对混合物进行离心分离，取离心后上清液转入硅膜吸附柱中，使DNA与硅膜吸附柱特异性结合后进行离心，然后依次加入漂洗液1、漂洗液2进行去蛋白，去多分多糖类物质离心，再加入漂洗液3进行脱盐离心，最后干燥离心后，加入无核糖核酸酶的水洗脱离心，得到含有基因组DNA溶液。本发明方法具有高效、快速、简洁的特点，提取所得基因组DNA纯度高，极大的消除了肝素对PCR实验的抑制，所得基因组DNA可进行聚合酶链式反应（PCR），实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time PCR）等下游实验。

主权项

一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤：（1）称取20毫克肝素钠样品置于1.5毫升离心管中，加入400微升裂解液，振荡混匀后放入65℃水浴锅中保持20分钟，每隔5分钟振荡一次，以使样品充分溶解，溶解后得到的混合液呈透明状；注意裂解液中含有不溶性树脂，使用前应充分振荡混悬。（2）将上述混合液置于离心机中进行离心分离，离心分离的转速为12000转/分钟，离心分离时间为5分钟；（3）取出步骤（2）中离心分离得到的上清液转入硅膜吸附柱中，将硅膜吸附柱放入1.5毫升离心管中，将离心管置于离心机中，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离的废液；（4）向步骤（3）的硅膜吸附柱中加入400微升第一漂洗液，放入80℃水浴中，保持10分钟，然后在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离的废液；（5）向步骤（4）的硅膜吸附柱中加入400微升第二漂洗液，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离废液；（6）向步骤（5）的硅膜吸附柱中加入500微升第三漂洗液，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离废液；（7）重复步骤（6）2～4次；（8）将步骤（7）的硅膜吸附柱放入1.5毫升离心管中，开盖离心分离2分钟；（9）将步骤（8）的硅膜吸附柱放入一个新的1.5毫升离心管中，向吸附柱中间悬空加入50微升去离子水，静置2分钟；（10）将步骤（9）中装有硅膜吸附柱的离心管在12000转/分钟的转速下离心分离1分钟，收集洗脱液，洗脱液为基因组DNA溶液。