[发明专利]中药材或中药制剂中细胞保护生物活性测定的新方法

摘要

本发明公开了一种适合水蛭、地龙等中药材或由其组成的中药制剂细胞保护生物活性测定方法，体外实验证明水蛭或地龙的提取液能够剂量相关的激活ERK激酶所在的信号传导通路，因此本发明通过采用蛋白免疫印迹法测定ERK等激酶的激活作用可反映含有水蛭或地龙药材成分的药物制剂的细胞保护活性，方法重现性较好。

主权项

一种含有水蛭或地龙成分的中药制剂的生物活性检测方法，其特征在于，通过检测ERK激酶所在信号传导通路的激活反映该中药制剂的细胞保护生物活性，所检测的蛋白分子包括EGFR和/或Src和/或Akt，所述检测方法包括如下步骤：(1)配制中药制剂供试品溶液：对于注射剂，直接取注射液作为供试品溶液，注射用粉针剂采用无菌生理盐水溶解后作为供试品溶液；对于固体制剂，采用适当方法提取活性成分后，用水、生理盐水或缓冲液溶解后无菌过滤作为供试品溶液；(2)细胞培养：采用细胞培养皿或细胞瓶培养细胞，当达到90‑95％的覆合度时，传代培养；(3)供试品激活并制备细胞裂解液：传代细胞达到80‑90％覆合度后，采用无血清培养基培养，使用含供试品溶液的无血清培养基激活细胞5～20min后，洗涤并裂解细胞，将细胞裂解液离心取上清，进行蛋白定量测定；(4)蛋白电泳‑免疫印迹分析：按常规操作，使用ECL试剂检测信号，并定量。