[发明专利]一种适合快速观测油棕叶片解剖结构的冷冻切片方法

摘要

本发明涉及一种适合快速观测油棕叶片解剖结构的冷冻切片方法，首先对冷冻切片机的冷冻箱、样品头设定温度，制作包埋纸盒并将其固定在样品盘中；选取油棕叶片材料，修剪成样品；在包埋纸盒中加入OCT冷冻包埋剂，然后将样品垂直放入包埋剂中，在-20℃条件下冷冻至冷冻包埋剂完全凝固，快速修剪包埋块后进行切片、封片，得到用于观察油棕叶片解剖结构的切片，将完成的切片在显微镜上观测，获得所需图像。本发明采用冷冻切片技术可快速获得油棕叶片结构完整的冷冻切片，切片平整、无皱褶、厚度均匀，显微结果清晰，有利于开展油棕叶片解剖结构的观察和研究，在培育适合我国栽培的品种或筛选优良种质资源类型的工作中具有重要的意义。

主权项

一种适合快速观测油棕叶片解剖结构的冷冻切片方法，其特征在于，其步骤如下：1)、冷冻切片机预冷：启动冷冻切片机，冷冻箱设定温度为‑20℃，样品头温度设定为‑10℃，待仪器各部位达到设定温度后开始后续操作；2)、材料固定：选用硬质白纸，裁剪折叠成长、宽、高均为5mm的纸框作为包埋纸盒；在样品盘中加入少量包埋剂，然后垂直将包埋纸盒放在样品盘上，再置于冷冻切片机中的冷冻台上，待包埋剂在低温条件下冷冻凝固后完成对包埋纸盒的固定；选取油棕叶片材料，修剪成2mm×2mm大小的方形样品；取出固定好包埋纸盒的样品盘，在包埋纸盒中加入OCT冷冻包埋剂，然后将修剪好的样品垂直放入包埋剂中，将样品盘放入冷冻切片机的箱体中，在‑20℃条件下冷冻至冷冻包埋剂完全凝固，完成待切材料的包埋与固定；3)、修剪包埋块：从冷冻切片机的冷冻箱中取出已经冷冻固定的包埋块，快速用手术刀片修剪包埋块，切除包埋块四周的纸壁和多余的包埋剂；4)、切片：这个过程分为三步，首先是样品初切，将样品盘装入样品头，安装刀片，将切片厚度调整至50μm‑60μm处，开始初切包埋块，直至除去样品组织边缘；第二步是切取目的厚度的切片，调整切片厚度至5μm，开始切第一片仍为50μm‑60μm厚度的切片，切下后清除，再切片即为目前所选5μm厚度，控制样品头匀速运动，可获得所需厚度的连续切片；第三步是观片的获取，将切片吸附到载玻片上，然后快速滴加甘油并盖上盖玻片，得到用于观察油棕叶片解剖结构的切片；5)、观片：将完成的切片在显微镜上观测，获得所需图像。