[发明专利]一种测定纳米金表面上巯基修饰线性DNA或核酸适配体构象的方法

摘要

本发明涉及一种测定纳米金表面上巯基修饰线性DNA或核酸适配体构象的方法，是利用动态光散射测定组装过程中线性DNA或核酸适配体与纳米金复合物的水合粒径，结合吸附动力学，分别测定线性DNA或核酸适配体在不同表面包被量时在纳米金表面上的构象。利用本发明的方法发现在中等表面探针容量时，线性DNA在纳米金表面上的构象为连接巯基的一端缠绕在纳米金表面，另一端与表面垂直向外伸展，随着表面探针容量的增加，每条DNA探针缠绕在纳米金表面上的长度不断减小，而同时向外延伸的尾部越来越长，但纳米金表面保持被DNA碱基吸附包裹的低表面自由能状态上述构象可以描述为DILOT模型，对于核酸传感器探针设计和基于DNA杂交的纳米组装等应用具有重要的指导意义。

主权项

一种测定纳米金表面上巯基修饰线性DNA或核酸适配体构象的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一：利用动态光散射(DLS)测定线性DNA或核酸适配体的纳米金复合物在其组装过程中的水合粒径，步骤二：结合拟合的线性DNA在纳米金表面上的吸附动力学模型，并通过对线性DNA或核酸适配体纳米金复合物水合粒径的直接比较，测定在不同表面容量时线性DNA或核酸适配体在纳米金表面上的构象；其中，步骤一如下：(1)利用动态光散射测定组装过程中不同长度巯基修饰线性DNA或核酸适配体纳米金复合物的水合粒径的动态变化过程；步骤二包括如下步骤：荧光测定老化过程中DNA在纳米金表面DNA链数和老化过程DNA在纳米金表面吸附动力学拟合；具体包括：(2)荧光测定老化过程中DNA在纳米金表面DNA链数：利用荧光标记和巯基修饰的线性DNA或核酸适配体在(1)相同的条件下还原并与纳米金包被；在老化过程的0‑17h中选取数个时间点对样品进行离心纯化，将包被上DNA链的纳米金沉淀复溶于二硫苏糖醇(DTT)磷酸盐缓冲溶液并过夜并离心取上清，根据标准曲线测定其上清液探针浓度并计算每个纳米金上DNA的包被量，相对应公式为：(3)老化过程DNA在纳米金表面吸附动力学拟合：根据准二级吸附动力学公式和粒径与包被量线性关系公式qe＝kde、qt＝kdt得到将(1)获得的粒径增长量带入中，若t/dt与t符合线性关系，即符合准二级吸附动力学模型；其中，为公式1，其中qe表示平衡吸附量，qt表示时间为t时的吸附量，Ks表示二级吸附速率常数；qe＝kde、qt＝kdt为公式2，其中de表示平衡时纳米金粒径增加量，dt表示时间为t时的纳米金粒径增加量，k为纳米金粒径增加量与DNA吸附量之间的比例常数；为公式3，其中Ks′为kKs。