[发明专利]一种板栗疫病菌巢式PCR检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了一种板栗疫病菌巢式PCR检测试剂盒及其使用方法。本发明的试剂盒包括(1)10×PCR Buffer，其成份为100mmol·L^-1Tris-HCl，PH8.3，500mmol·L^-1KCl；(2)2.5mmol·L^-1的dNTP；(3)25mmol·L^-1的MgCl2；(4)5U·μL^-1Taq酶；(5)10μmol·L^-1的引物ITS1/ITS4，其中ITS1序列为5＇-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3＇，ITS4序列为5＇-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3＇；(6)10μmol·L^-1的引物ITSP1/ITSP2，其中ITSP1序列为5＇-CCAGATACCCTTTGTGAACT-3＇，ITSP2序列为5＇-TCAGAGTCTTAGCGAGCC-3＇；(7)灭菌双蒸水。本发明采用ITS1/ITS4和ITSP1/ITSP2组成巢氏PCR，可检测到3fg·μL^-1基因组DNA，灵敏度至少可提高1000倍。利用本发明的试剂盒能准确地从板栗自然发病的及携菌组织中检测到病原菌。

主权项

一种板栗疫病菌巢式PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括(1)10×PCR Buffer，其成份为100mmol·L^‑1Tris‑HCl，PH8.3，500mmol·L^‑1KCl；(2)2.5mmol·L^‑1的dNTP；(3)25mmol·L^‑1的MgCl₂；(4)5U·μL^‑1Taq酶；(5)10μmol·L^‑1的引物ITS1/ITS4，其中ITS1序列为5＇‑TCCGTAGGTGAACCTGCGG‑3＇，ITS4序列为5＇‑TCCTCCGCTTATTGATATGC‑3＇；(6)10μmol·L^‑1的引物ITSP1/ITSP2，其中ITSP1序列为5＇‑CCAGATACCCTTTGTGAACT‑3＇，ITSP2序列为5＇‑TCAGAGTCTTAGCGAGCC‑3＇；(7)灭菌双蒸水。