[发明专利]生物电镜样品碳化方法

摘要

本发明属生物样品制备领域，具体涉及一种生物电镜样品碳化方法。本发明中采用0.1M四氧化锇液体的挥发性气体对生物有机样品进行熏蒸、灼烧，使生物有机样品达到完全碳化符合扫描电镜观察的要求，本发明方法制得的生物电镜样品有更好的表达结果，且环保低碳、操作简便、整个样品的化学物理收缩率小、形貌结构几乎无改变，细微结构清晰。本发明突破了一些电镜样品制备的瓶颈，使一些原来无法制备的透射电镜样品、扫描电镜样品能够顺利完成样品制备达到电镜观察要求，本方法可用于生物样品组织、细菌、有机高分子蛋白体或有机高分子物质生物电镜样品制备。

主权项

1.一种生物电镜样品碳化方法，其特征在于，采用0.1M四氧化锇液体的挥发性气体对生物有机样品进行熏蒸、灼烧，使生物有机样品完全碳化；其包括下述步骤：1)样品处理：取离体动物或人体的器官组织块，常规处理后，用2.5％戊二醛固定2小时或者更长时间，4℃冷藏固定2小时以上，缓冲液漂洗2次，每次10分钟；2)取电镜镍网做支架，将组织块除去表面水渍，置于电镜镍网上面；或，将有机高分子物质的悬浮液滴在含有碳膜的载网上面，经3‑5分钟的吸附，除去上清多余悬液，微干备用；3)取底部加100ul的1％浓度的四氧化锇溶液的离心管，使其横置、形成底部的液态涨力留置；4)将置有组织的镍网支架转移至离心管的中部或者口端部，离心管封盖以及加封口膜封口、标注样品性质、样品标记号，集合多个离心管样品放入统一的器皿，再封口，标注碳化起始时间；5)转移到冰箱4度冷藏空间开始碳化，不同的组织碳化时间在24—72小时之间；6)取出已碳化的样品，转移样品到新的离心管中、开盖放置37℃温箱3‑4小时，加盖封口保存；7)喷金、扫描电镜观察。